邵阳市疾病预防控制中心 湖南邵阳 422001
【摘 要】目的：对乙肝两对半检测的结果进行统计分析，探讨其临床意义和影响因素。方法：选择2014年1月至2015年12月在我中心体检的1658例体检者作为本次的检测研究对象，分析其检测结果及影响结果准确性的因素。结果：本次研究共检测1658分标本，共检出HbsAg阳性标本62例，占3.74%；HbsAb阳性标本987例，占59.53%；HbeAg阳性标本42例，占2.53%；HbeAb阳性标本18例，占1.09%；HbcAb阳性标本25例，占1.51%，影响检测结果准确性的因素有样本的采集及处理，试剂的影响，操作因素的影响。结论：乙肝两对半检测对乙肝病毒的检出有重要作用，应尽量排除影响因素的干扰进行鉴别。
【关键词】乙肝两对半；ELISA 检测；临床意义；影响因素
乙型病毒性肝炎（下称乙肝）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性传染性疾病，机体一旦感染乙型肝炎病毒，则会出现一系列的反应及临床症状，严重危害患者的身体健康，增加患者的心理及经济负担[1]。目前主要采用ELISA法检测患者血清中的乙型肝炎血清学标志物来确定患者是否感染乙型肝炎病毒，血清学标志物主要包含HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五种，也就是俗称的乙肝两对半，乙肝的预防、诊断与疗效等方面很大程度都依赖乙肝两对半的检测[2-3]。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝免疫学标志物的主要方法，具有简便、灵敏、特异性高等优点，成为基层医院对乙肝诊断分型疗效观察的主要手段。但ELISA 测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性[4]。因此，排除各种影响因素的干扰，有利于提高检测结果的准确性。本研究对乙肝两对半检测的结果进行统计分析，探讨其临床意义和影响因素。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2014年1月至2015年12月在我中心体检的1658例体检者作为本次的检测研究对象，其中男性检测者625例，女性体检者1033例，年龄19～41岁，平均（31.2±5.24）岁。
1.2 检测方法 研究对象在清晨空腹采集静脉血3ml以上，待血块自行凝固后分离血清备检，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝免疫学标志物，包括表面抗原（HbsAg）、表面抗体（HbsAb）、e 抗原（HbeAg）、e 抗体（HbeAb）、核心抗体（HbcAb）。
1.3质量控制：酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法均加入阳性及阴性对照进行质量控制。
1.4统计学方法：采用SPSS 16.0进行统计分析，计数资料采用X2分析，以p <0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
本次研究共检测1658分标本，共检出HbsAg阳性标本62例，占3.74%；HbsAb阳性标本987例，占59.53%；HbeAg阳性标本42例，占2.53%；HbeAb阳性标本18例，占1.09%；HbcAb阳性标本25例，占1.51%，具体结果见表1。
3讨论
3.1常见检测结果分析
3.1.1 三项阳性者①乙肝大三阳：该检测结果的患者一般处于急、慢性感染期，此时乙肝病毒大量复制，传染性较强。HBcAb、HBeAg、HBsAg 三项为阳性，其余为阴性。②乙肝小三阳：该检测结果表明传染性较弱，指患者处理感染的恢复期或为慢性抗原携带者，HBcAb、HBeAb、HBsAg 三项为阳性，其余为阴性。③乙肝恢复期：HBeAb、HBcAb、HBsAb 为阳性，其余两项阴性[5]。
3.1.2 两项阳性者①急、慢性乙肝：HBsAg、HBcAb 为阳性，其余为阴性。②急性乙肝的早期：HBsAg、HBeAg 为阳性，其余为阴性。③乙肝恢复期或有乙肝病史：HBeAb、HBcAb 为阳性，其余为阴性。④具备乙肝抵抗力（接种过乙肝疫苗或感染后已恢复）：HBsAb、HBcAb 为阳性，其余为阴性[5]。
3.1.3单项阳性者①乙肝潜伏性：HBsAg 阳性，其余四项阴性。②感染的窗口期或隐形携带者或受乙肝病毒感染：HBcAb阳性，其余4 项阴性[5]。
3.2常见影响因素分析
3.2.1临床工作中无法采集到无干扰物血清或因操作因素导致标本出现溶血时，评估标本干扰物含量及标本处理情况，在有效范围内进行ELISA 检测，对于溶血标本可先测定血浆Hb 含量，不大于5g/L 时可用于HBsAg 的检测，超过此范围的阳性标本最好做复检，避免假阳性结果发生。目前也有通过增设试验孔的方法来处理轻度甚至重度溶血标本的检测，使溶血造成的假阳性结果得到纠正，且有非常显著性统计学意义[6]。
3.2.2有研究证实通过实验报道乳糜样品含福尔马肼浊度小于1460FTU 的乳糜时，对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法的检测结果均无影响。但是也有研究认为认为脂质颗粒会黏附在反应孔内壁，使吸光度A 值增高出现假阳性[7]。
3.2.3结合胆红素浓度不大于344μmol/L 对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法的检测结果均无影响，超过浓度的样本应重新采集，对于黄疸病人为保证检测结果的可靠性可选择其他检测方法[8]。
3.2.4人类血清中含有天然异嗜性抗体，而异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗产生假阳性结果。来自哺乳动物的固相抗体及酶标二抗可激活人体补体系统，在反应过程中抗体分子结构发生变化，暴露补体的结合位点，产生假阳性结果，也可能固相抗体因为活化补体的结合导致抗原抗体的表位结合能力下降，出现
假阴性结果[9]。
3.2.5研究表明，高效价乙型肝炎免疫球蛋白可以和HBsAg 形成免疫复合物，使HBsAg 阳性患者检测呈阴性，出现两对半少见模式；部分HBsAg阴性者接种乙肝疫苗1-2周后血清中可检测到HBsAg，造成HBsAg 一过性阳性，所以乙肝疫苗接
种后一个月内最好避免做乙肝两对半检查[10]。
3.2.6一些细菌的菌体中可能含有内源性过氧化物酶会对使用相应酶做标记的测定方法产生影响，污染细菌可能含有内源性辣根过氧化物酶，使试剂出现非特异性显色造成假阳性而干扰结果。
3.2.7试剂的质量如抗原抗体的纯度及亲和力、标记物的比活性、滴度及特异性等直接影响检测结果，为保证检测质量，所有试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批检测合格，临床评估特异性、敏感性、稳定性较高且在有效期内才有使用价值。不同厂家试剂敏感性、特异性不尽相同，有报道不同厂家酶标板孔间A 值差大小可达15%，标记酶的活性及显色液的稳定性也相差较大，所以合理有效的试剂选择尤为重要[11-12]。
3.2.8标本的运输及保存、检测人员的自身素质均可能对检测结果造成不良影响，为避免出现错误样品应准确标明编号、种类、受检者姓名及采集时间，收集后认真核对，拒收不符合要求的标本及申请单，严格按照拒收制度处理，同时处理合格标本，做好后续工作，避免延误导致标本出现溶血等其它不良情况。
3.2.9ELISA 检测加样时应垂直将样本准确加入微孔底部，注意避免吸头碰到酶标板上的包被物，尽量慢吸快放，防止溅出或产生气泡，避免液体外溅使血清残留在反应壁上。每次吸样注意更换吸头，做到一样一吸头，避免交叉污染，干吸头每次加样前在血清中抽吸三次保证吸样准确，滴加试剂时建议先将滴瓶摇匀挤去第一滴再加样[13]。
3.2.10温育是ELISA 至关重要的一步，不同的温育环境对检测结果有影响，操作中应严格按照说明书控制温育时间及温度，并注意封闭避免边缘效应。为确保各板温度都能迅速达到平衡，不可将反应板叠加放置，设定的温度及时间严格按照说明书进行，一般加入待测标本后使其与固相抗原（抗体）置于37℃环境下温育[14]。
3.2.11洗板目的在于将特异性结合于固相上的抗原（抗体）与温育过程中吸附的非特异性成份分离，使免疫复合物与待测抗体（抗原）呈一定比例，洗板是否合格直接影响检测结果的准确性。洗板应严格按照说明控制洗板时间及洗板次数，ELISA 检测一般用洗涤液洗板5次，洗涤液应严格按照操作说明进行稀释，洗液应注满每个微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出现假阴性及假阳性结果。
3.2.12试剂显色时A、B 液按顺序加入且间隔不超过10min，如先将两液混合再加样则需保证等体积混合。显色剂不宜过多，注意避光反应。显色是最后一步温育反应，酶将无色底物催化反应呈有色，反应的温度和时间均为影响结果的重要因素，目前市场上大多数进口的ELISA 检测显色温度处于18~30℃。一定时间内，阴性孔可保持无色，但阳性孔会随时间的延长而显色加强[15]。
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作者简介：
范艳萍（1976-），女，本科，主管技师，主要研究方向：微生物检验医学。
论文作者:范艳萍,朱茂平
论文发表刊物:《航空军医》2016年第13期
论文发表时间:2016/8/28
标签：阳性论文; 乙肝论文; 标本论文; 抗体论文; 阴性论文; 乙型肝炎论文; 抗原论文; 《航空军医》2016年第13期论文;