江西省萍乡市芦溪县人民医院 337200
摘要：目的：了解我院住院患者呼吸道标本培养中流感嗜血杆菌（HIN）的培养分离检出情况与耐药情况。方法：选取我院2017年8月——2019年1月临床送检呼吸道标本所分离的流感嗜血杆菌96株，使用巧克力万古琼脂培养基结合革兰染色分离疑似流感嗜血杆菌，挑选可疑菌落进行卫星试验和Ⅴ、Ⅹ、Ⅴ＋Ⅹ因子需求试验，以纸片扩散法（K-B法）测定药物敏感试验结果，依照CLSI2017版标准判断结果，试验数据应用WHONET软件进行分析。结果：共分离出流感嗜血杆菌96株，96株流感嗜血杆菌对氨苄西林 、复方磺胺甲噁唑 、头孢呋辛 、头孢噻肟 、阿莫西林/棒酸、阿奇霉素、美培培南 、氨曲南、左氧氟沙星、利福平的耐药率分别为 52.5％ 、78.9％ 、 21.6％ 、0 、45.0％ 、0％％、0％、0％、0％、23.1％。结论：实验室人员应重视流感嗜血杆菌分离率的提高，定期统计流感嗜血杆菌药物敏感试验数据，为临床使用抗菌药物提供指导依据。
关键词：流感嗜血杆菌；巧克力万古琼脂培养基；革兰染色；K-B法；耐药性
流感嗜血杆菌是临床常见的病原菌之一，是一种只侵犯人类的革兰阴性菌，属条件致病菌，常寄居于人呼吸道系统。当机体免疫力下降或免疫力缺陷时，该病原菌可急性化脓感染及严重继发感染[1]。现阶段，流感嗜血杆菌对抗菌药物的耐药率不断增加，提高流感嗜血杆菌分离率、检测流感嗜血杆菌耐药性显得尤为重要。为了了解我院流感嗜血杆菌的耐药情况，为临床医生合理用药提供指导依据，现对我院2017年8月——2019年1月分离的96株流感嗜血杆菌耐药情况进行分析。具体报道如下：
1 资料和方法
1.1标本来源
收集我院2017年8月——2019年1月临床送检呼吸道标本所分离的流感嗜血杆菌96株，其中儿童标本36例，成人标本60例。
1.2试剂
血平板 、巧克力平板（含0.5mg／mL 万古霉素）、水解酪蛋白（M H）培养基、HTM 药物敏感试验培养基均由杭州滨和生物有限公司提供半成品，实验室自行配制。巧克力平板配制：于85摄氏度加入羊血并保持15分钟，期间不断摇动，使羊血红细胞充分破坏，形成大的块状物，使其充分释放出X因子。冷却至56℃时加入7.5mg/ml的辅酶I（即V因子），和25mg/ml的万古霉素（用来抑制其他阳性菌的生长），倾倒平皿。Ⅴ、Ⅹ、Ⅴ＋Ⅹ因子，氨苄西林 、复方磺胺甲噁唑 、头孢呋辛 、头孢噻肟 、阿莫西林/棒酸、阿奇霉素、美培培南 、氨曲南、左氧氟沙星、利福平药物敏感试验纸片均购自温州康泰公司。
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1.3标准菌株
金黄色葡萄球菌 ATCC２５９２３ 、流感嗜血杆菌 ATCC１０２１１。
1.4方法
1.4.1菌株的分离与鉴定
送检标本经涂片染色检查。鳞状上皮细胞＜10个/高倍视野，白细胞＞25个/高倍视野或者鳞状上皮细胞：白细胞＜1∶2.5视为合格标本[2]，接种于血平板、巧克力平板 ，37℃、5% CO2培养箱培养24h。挑取血平板上不长；巧克力平板上的透明或半透明、扁平、湿润的露滴状菌落涂片染色，将革兰阴性小杆菌列为疑似菌落重新转种于巧克力平板，置37℃、5% CO2培养箱培养24h后，挑取单个菌落配制成0.5麦氏浊度菌悬液，均匀涂布在M H琼脂表面和血平板表面，置室温干燥３～５min，血平板上点种金黄色葡萄球菌进行卫星现象试验，MH培养基贴Ⅴ因子、Ⅹ因子、Ⅴ＋Ⅹ因子纸片，纸片间距24mm，置37℃、5% CO2培养箱培养24h后观察。血平板上卫星试验阳性同时不溶血的菌落，M H平板上同时需要Ⅴ因子、Ⅹ因子均为阳性的鉴定为流感嗜血杆菌。
1.4.2药物敏感试验试验
挑取鉴定合格的菌落，以流感嗜血杆菌ATCC10211为质控菌株 ，采用纸片扩散法（K-B 法）分别进行氨苄西林 、复方磺胺甲噁唑 、头孢呋辛 、头孢噻肟 、阿莫西林/棒酸、阿奇霉素、美培培南 、氨曲南、左氧氟沙星、利福平10种抗菌药物的敏感性测定 ，按美国临床实验室标准化协会 （CLSI）2017版的判定标准测量抑菌圈直径，以及判定耐药和敏感。
1.4.3 β-内酰胺酶试验
采用头孢硝噻酚法，在头孢硝噻酚纸片上加１滴无菌蒸馏水 ，纸片浸湿后将菌落涂布于纸片上 ，１小时内变红表示为β-内酰胺酶阳性菌株。
1．5 统计学处理 应用WHONET５．６对试验数据进行统计分析。
2 结果
2017年8月——2019年1月共送检1679份痰标本，检出细菌443株，分离出流感嗜血杆菌 96株，占21.7%，其中幼儿患者分离出36株，占37.5％；成人患者分离出60株，占62.5％。96株流感嗜血杆菌对氨苄西林 、复方磺胺甲噁唑 、头孢呋辛 、头孢噻肟 、阿莫西林/棒酸、阿奇霉素、美培培南 、氨曲南、左氧氟沙星、利福平的耐药率分别为 52.5％ 、78.9％ 、 21.6％ 、0 、45.0％ 、0％％、0％、0％、0％、23.1％。
96株流感嗜血杆菌β-内酰胺酶阳性株共检出 28 株（29.1％ ），氨苄西林均耐药。
3 讨论
。本次96株流感嗜血杆菌药敏结果显示，耐药率较高的为复方磺胺甲噁唑、氨苄西林，提示该类药物不宜作为流感嗜血杆菌感染的经验用药。头孢噻肟 、阿奇霉素、美培培南 、左氧氟沙星的耐药率为0%，可作为经验治疗流感嗜血杆菌感染的首选药物。由于近年来抗菌药物的广泛应用，造成菌株耐药水平不断上升[3]。β-内酰胺酶阳性株共检出 28 株（29.1％ ），其氨苄西林均耐药。所以检测出β-内酰胺酶阳性株的病患就应避免使用这类药物。本次研究了解流感嗜血杆菌的细菌耐药性，对于指导临床医生合理使用抗菌药物具有积极意义。
参考文献：
[1]张莉,彭丽,张晓兵,郭述良.下呼吸道临床分离菌的分布及敏感性变迁[J].中国感染与化疗杂志,2016,16(3):363-367.
[2] 秦惠宏,孔菁,王春,姚剑杰,张泓. 2012年上海市儿童医院细菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志. 2015,15(02):113-119.
[3] 田磊,张真,陈中举,李丽,张蓓,朱旭慧,闫少珍,汪玥,高随,简翠,孙自镛,叶嗣颖. 某院流感嗜血杆菌耐药性及其对氨苄西林耐药机制[J].中国感染控制杂志. 2015(02):73-76.
论文作者:张雪英
论文发表刊物:《医师在线（学术版）》2019年第04期
论文发表时间:2019/4/10
标签：杆菌论文; 流感论文; 嗜血论文; 头孢论文; 氨苄西林论文; 平板论文; 药物论文; 《医师在线（学术版）》2019年第04期论文;