唐双意[1]2001年在《五步蛇无出血活性纤溶酶的药效学研究》文中指出目的：从蝮亚科五步蛇（Agkistrodon acutus）分离纯化出无出血活性的纤溶酶（Non-hemorrhagic fibrinolytic enzyme，NHFLE），研究其对血栓形成的溶解作用，对动物体内外抗凝作用的影响和安全性实验。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化五步蛇毒纤溶酶，用纤维蛋白平板法测定纤溶活力，SDS-PAGE测定纤溶酶分子量，用浊度法研究其对富血小板血浆中ADP诱导的血小板聚集的影响。测定五步蛇无出血活性纤溶酶对家兔肺动脉栓塞和动物血栓的溶栓作用，对大白鼠静脉血栓的溶栓效果，对动物体内外抗凝作用的影响以及溶血性实验、急性毒性实验、过敏、出血性实验。结果：从五步蛇毒中分离纯化出分子量为25KD，无溶血、过敏及出血毒性的纤溶酶，其对ADP诱导的血小板聚集无抑制作用，对肺动脉血栓、动脉血栓、静脉血栓湿重均有明显减轻作用，与生理盐水对照组相比，均有显着差异（P＜0.05或P＜0.01）。体内外实验表明，NHFLE能直接溶解纤维蛋白，能显着延长全血凝固时间、活化部分凝血酶时间、凝血酶时间和凝血酶原时间，产生抗凝作用。体内实验表明，注射NHFLE后血浆纤维蛋白原降低，优球蛋白的溶解时间缩短。结论：五步蛇无出血活性纤溶酶对动物血栓有明显的溶栓作用，有抗凝作用，是一个有效、安全的新型抗血栓制剂，具有潜在的临床应用价值。
彭均华[2]2004年在《尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶药物代谢动力学及毒理学的研究》文中研究指明目的：研究从蝮亚科尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)分离纯化出的无出血活性纤溶酶(Non-hemorrhagic fibrinolytic enzyme，NHFLE)的一般药理学、药物代谢动力学及毒理学，了解该药在体内的变化规律，评价其安全性，为进一步临床研究提供实验依据。 方法： 1．小鼠尾静脉注射2.0、1.0、0.5mg／kg高、中、低叁组剂量的NHFLE后，观察一般行为、协调活动、对阈下戊巴比妥钠的催眠作用。尾静脉注射1.4、0.7、0.35mg／kg高、中、低叁组剂量的NHFLE，观察大鼠的心率、心电、平均动脉压、呼吸频率和深度以及大鼠的凝血时间等指标。对照组给予生理盐水。 2．药物代谢动力学采用氯胺T法对NHFLE进行~(125)I标记，经Sephadex G-50柱分离纯化，测定其放化纯度。通过静脉注射~(125)I-NHFLE，应用放射性核素示踪技术研究~(125)I-NHFLE在大鼠体内的血药浓度、组织器官的分布以及在尿、粪、胆汁中的排泄。 3．用昆明种小鼠尾静脉注射给药观察NHFLE的急性毒性。 4．Wistar大鼠，连续尾静脉注射9.0、4.5、2.25mg／kg高、中、低叁种不同剂量的NHFLE 4周，对照组给等容积的生理盐水，观察NHFLE的长期毒性。 结果： 1．静脉注射NHFLE，对小鼠的一般行为、协调活动和阈下戊巴比妥钠的催眠作用无影响；各组剂量NHFLE对大鼠心率、心电电压以及呼吸的频率和深度也无影响。在大鼠凝血试验中，1.4mg／kg的高剂量组在10-30min内显着延长大鼠的凝血时间(P＜0.05)，在60min后恢复正常，其余剂量组对大鼠凝血时间没有影响。 2．~(125)I-NHFLE的标记率比为7.318MBq／mg NHFLE。放射性浓度25.8GSq／L。大鼠静脉注射NHFLE1.4、0.7、0.35mg／kg叁个剂量后，主要药代动力学参数：t_(1／2α)为0.626～0.672h，t_(1／2β)为10.384～13.818h，t_(1／2α)及t_(1／2β)在叁组剂量间无显着性差异(P＞0.05)。AUC分别为7073.03±124.14、3920.00±549.64、3315.78±125.30μg·h·L~(-1)，与剂量成正比(P＜0.05)。血药浓度-时间曲线经拟合符合二房室开放模型。给药24h，在尿、粪、胆汁中的累积排泄率分别占注射剂量的75 .31%、3.29%和6.54%。给药48h，在尿、粪中的累积排泄率分别达到86 22%及4.98%。给药lh内，各脏器中放射活性达到峰值，‘251一NH于LE在大鼠体内的分布以肾脏中放射活性为最高，其次为甲状腺、肝、脾、胃，在脑、脂肪、肌肉中的含量很低。 3.小鼠急性毒性:NHFLE尾静脉给药小鼠的LDS。为28.84mg瓜g。 4.大鼠长期毒性:大鼠连续静脉给药4周，高剂量组大鼠出现多动、烦躁不安、轻微腹泻以及体重增长缓慢(P<0 .05)，以上改变在停药恢复期得到改善，其余动物体重增长、外观及一般行为未见异常。血液学及血生化检查、脏器系数、病理检查均未见异常。 结论:一般药理学研究表明NHFLE对动物的神经系统、心血管系统、呼吸系统均无影响。药代动力学实验发现两个时相的半衰期在各剂量组之间无差异，AUC与剂量成正比，排泄以肾脏为主。毒性试验证实该药毒性低，临床应用安全性好。
唐景财[3]2011年在《可口革囊星虫纤溶酶的分离纯化及其性质的研究》文中认为目的从可口革囊星虫中分离纯化出纤溶酶,并对其酶学性质、部分药理作用进行研究。方法采用匀浆、抽提离心、QAE-sephadex A-25离子交换、sephacryl S-300凝胶过滤等方法分离纯化可口革囊星虫纤溶酶;以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯度及分子量。用纤维蛋白平板法测定可口革囊星虫纤溶酶的活性、对纤维蛋白的作用方式、pH、温度、金属离子、酶抑制剂对酶活力的影响。用纯化的可口革囊星虫纤溶酶对小鼠进行皮下出血实验;溶血性实验;体外血凝块溶解实验及观察对家兔血浆优球蛋白溶解时间(ELT)、凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)等指标的影响。结果从可口革囊星虫中分离得到纯的纤溶酶,相对分子质量为29.8×10~3,纯化倍数87,回收率5.4%。该酶在pH2-11和50℃以下有较好活性,pH=8时酶活力最高。金属离子Cu~(2+)、Mg~(2+)、Ba~(2+)、Al~(3+)、Na~+、K~+对可口革囊星虫纤溶酶活性无影响,Ag~+、Zn~(2+)对纤溶酶活性有一定的抑制作用,Hg~(2+)能完全抑制酶活性,丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF)和金属酶抑制剂(EDTA)对它有一定的抑制作用。可口革囊星虫纤溶酶既可直接降解纤维蛋白,又能激活纤溶酶原间接地溶解纤维蛋白。可口革囊星虫纤溶酶无出血毒性,不引起机体出现溶血反应;家兔体外溶栓实验中,能明显溶解血凝块、缩短ELT;显着延长PT、APTT。结论从可口革囊星虫中分离得到单一组份的纤溶酶,该酶性质稳定、具有一定的体外溶栓作用。
参考文献：
[1]. 五步蛇无出血活性纤溶酶的药效学研究[D]. 唐双意. 广西医科大学. 2001
[2]. 尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶药物代谢动力学及毒理学的研究[D]. 彭均华. 广西医科大学. 2004
[3]. 可口革囊星虫纤溶酶的分离纯化及其性质的研究[D]. 唐景财. 广西医科大学. 2011