（1、河南省医药科学研究院，河南 郑州 450052； 2、郑州大学第一附属医院，河南 郑州 450052）
摘要
目的：研究拟缺香茶菜乙醚和乙酸乙酯提取物的体外抗肿瘤及抗菌活性。方法：采用MTT法测定拟缺香茶菜乙醚和乙酸乙酯提取物对人肝癌细胞株HepG2 增值的抑制活性，用试管稀释法测定拟缺香茶菜乙醚和乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、大肠艾希菌等菌种的抗菌活性。结果：拟缺香茶菜乙醚提取物对人肝癌肿瘤细胞HepG2具有一定的抑制作用，并在测定浓度范围内呈现良好的剂量依赖性，且对金黄色葡萄球菌和大肠艾希菌这两种菌株有较灵敏的抗菌活性。结论：拟缺香茶菜乙醚提取物具有较显著的体外抗肿瘤及杀菌活性，为今后分离出抗癌及抗菌单体化合物提供科学的参考依据。
关键词：拟缺香茶菜；抗肿瘤；抗菌活性
Study on the biological activity of the Isodon excisoides extracts
CHEN Huiping1, MA Fang1, WANG Ruijuan2, ZOU Min1, SHI Mengchao1,LUO Yu1,GUO Wei1
(1．Academy of Medical and Pharmaceutical Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China；2.The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China)
Abstract
Objective: To study the antitumor and antibacterial activity of Isodon excisoides extracted by dieth-yl ether and ethyl acetate. Methods: Using diethyl ether and ethyl acetate ethanol as the extracted solvents, the vitro cytotoxicity study was con-ducted based on the above kinds of extracts by MTT method;To study the antibacterial activity of Isodon excisoides extracted by dieth-yl ether and ethyl acetate, the tube dilution method was uaed for determination of Isodon excisoides extration . Results: In the wake of the different concentrations of isodon excisoides extracts, the proliferation inhibition rate of the kinds of tumor cell is different. There are more sensitive antimicrobial activity against Staphylococcus aureus and Escherichia coli.Conclusion: Isodon excisoides ether extract show better antitumor and antibacterial effects, this provided a scientific justification for the future separation of anticancer and antibacterial compounds.
Keywords: Isondon excisoides; antitumor ; antibacterial activity
拟缺香茶菜是唇形科香茶菜属植物，资源丰富，种类繁多，广泛分布于亚洲和非洲各地，在我国约有90余种，除新疆、青海及内蒙古外，几乎遍布全国。
河南省自然科学基金研究项目资助142300410230
河南省自然科学基金研究项目资助152300410160
该属植物具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎、抗肿瘤、治疗各种肝炎等功效，
民间常作为清火、抗癌、消炎和抗菌药应用【1】【2】。本实验研究发现拟缺香茶菜
乙醚提取物对肿瘤细胞有较强的抑制作用，此外还有抗菌活性，进一步确定了拟缺香茶菜乙醚提取物为抗肿瘤及抗菌活性部位，为分离出抗肿瘤及抗菌活性成分提供科学的理论依据。
1材料与方法
1.1药材
拟缺香茶菜采自河南洛阳栾川龙峪湾，由郑州大学药学院李继成教授鉴定，并保存在郑州大学标本馆。取拟缺香茶菜地上部分自然阴干，粉碎装密封塑料袋放冰箱保存备用。
1．2主要药品与试剂
四甲基偶氮唑蓝( methylthiazolyl tetrazolium, MTT)（美国Solarbio公司）；RPMI-1640培养基（美国Solarbio公司）；优质胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；其余试剂均为市售分析纯。
1．3 主要仪器
RE-2000型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；CO2培养箱(力康发展有限公司，HF160W)； 倒置生物显微镜（奥林巴斯BDS200）；EXL800uv全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司，168-1000XC）；生物安全柜（力康发展有限公司，HFsafe-1200TE）；精密可调微量移液器（德国Eppendorf公司）。
1．4细胞系及菌株
人肝癌细胞系HepG2由河南省医药科学研究院药化室提供；金黄色葡萄球菌和大肠艾希菌等菌株均由河南省医药科学研究院免疫微生物研究室提供。
1．5 活性部位提取
取原药材1kg，粉粹，用无水乙醚5000ml浸泡21d(乙醚的用量以乙醚淹没药材为准)，用滤纸常温常压下过滤，减压浓缩得浸膏(乙醚提取物)29g。乙醚提过残渣晾干无已醚味，加入3500ml乙酸乙酯，加热回流2h，然后常温常压下过滤的2800ml提取液，加压浓缩得到乙酸乙酯浸膏（乙酸乙酯提取物）22g。
1．6细胞培养
细胞株HepG2为贴壁细胞，使用含 10% 胎牛血清的RPMI-1640培养基，在37℃饱和湿度、5% CO2培养箱中常规培养；每2-3d换液1次，当细胞汇合度达90%时，进行传代培养。实验过程中用台盼蓝染色法检测细胞活性。
1．7细胞生长抑制试验
收集对数生长期细胞，用细胞计数板计数，调整细胞悬液浓度为7-8×104/ml，96孔细胞培养板中每孔加入100μl，每个浓度设三个复孔，细胞培养箱（5% CO2，37℃）中孵育24h，待细胞贴壁后，小心吸去上清，加入含有不同药物浓度的培养基100μl，并设正常对照孔、溶剂对照孔及阳性对照孔。连续培养24、48、72h后，每孔加入20μl MTT溶液（5mg/ml），继续培养4h后，小心吸去孔内培养基，每孔加入DMSO 150μl，置摇床上低速避光振荡6min，使结晶物充分溶解，酶标仪（检测波长490nm参考波长630nm）测定，并读取各孔吸光度（A）值，按公式“抑制率（%）= （1-给药孔A值/正常对照孔A值）×100%”计算各药物对肿瘤细胞生长抑制率。
1．8试管稀释法。
称取乙醚和乙酸乙酯提取物各100mg,分别用1ml二甲基亚枫（DMSO）溶解，加MH培基至4ml,提取物含量为25mg/ml。提取物对倍稀释四个稀释度，分别接种各试验菌株，36.0℃过夜培养后观察生长情况。以不生长的最低提取物含量为该提取物的MIC。
2结果
2.1 各提取部位对体外培养的肿瘤细胞增殖的抑制作用
用HepG2细胞株对拟缺香茶菜提取物在6.25-100μg/ml范围内筛选，各提取部位对肿瘤细胞均有较强的生长抑制作用，在测定范围内随着浓度增加抑制率随之升高，存在浓度依赖性。结果见表1、2。
2.2 各提取部位体外杭肿瘤作用的比较
线性回归法计算各提取部位的半数有效抑制浓度（IC50）值，见表3。比较各提取物的IC50值，可看到乙醚提取物对肿瘤细胞株的72h的IC50值最低，表明在各提取物中乙醚提取物的体外抗肿瘤活性较强；乙酸乙酯提取物次之，说明其具有较强的体外抗肿瘤活性。
2 讨论
目前，新药筛选化合物库中有70%左右为有机化学产物，约25%为植物成分，因此植物化学成分是筛选先导化合物的重要来源。由植物开发为药物的如阿司匹林、青篙素及紫杉醇等，在解除和缓解人类痛苦中发挥了不可代替的作用[3]。
随着分子肿瘤学研究的深入，抗肿瘤天然药物研发过程中体外抗肿瘤实验已成为必不可少的一部分[4]。MTT法是运用MTT显色剂被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲瓚，而间接反映出活细胞数量，该方法有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济等特点常用于抗肿瘤药的体外初筛试验[5] [6]；是观察癌细胞体外抗肿瘤活性的常用方法。本次实验选用拟缺香茶菜乙醚提取物和乙酸乙酯提取物进行了细胞毒性试验，结果表明这两种提取物对HepG2肿瘤细胞有不同的抑制作用。由表1和表2结果可知：拟缺香茶菜乙醚提取物对HepG2肿瘤细胞的抑制作用受时间的影响：时间越长抑制效果越好。由表4和表5可看出拟缺香茶菜乙醚提取物对金黄色葡萄和大肠杆菌有较好的抑制作用，而拟缺香茶菜乙酸乙酯提取物仅对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用。
参考文献：
[1]鲁利娜 ，王晶娟等.香茶菜属植物的化学成分及药理活性研究进展[J].中国会议 ，2015.421-424
[2]李火云,焦珂,张鹏等.拟缺香茶菜化学成分研究[J].中草药.2014.45(2):154-160.
[3] 赵爱国，韩宇萍等. 从植物药中筛选先导化合物的策略[J].药业专论，2002,13（9）:516-518.
[4]梁会娟,刘伟等.蓝萼香茶菜化学成分与生物活性研究[J].新乡医学院学报,2014.31(3):161-165.
[5] 上官丹罡，龙明辉，龚倩等，有色脂溶性化合物的 MTT 实验中关键影响因素的分析与方法改进[J].中南药学，2015，13（7）：697-700.
[6] 孙卫国，王芳，刘农乐等，MTT 实验检测重组人角质细胞生长因子－2 诱导不同细胞系增殖的差异[J].生物技术通讯2011，22（2）:225-228
论文作者:陈慧平 ，马方1，王瑞娟2，邹敏1，师孟超1，罗玉1，郭葳1
论文发表刊物:《中西医结合护理》2015年4期供稿
论文发表时间:2015/12/14
标签：提取物论文; 乙酸乙酯论文; 乙醚论文; 香茶论文; 活性论文; 细胞论文; 抑制论文; 《中西医结合护理》2015年4期供稿论文;