（邵阳市疾病预防控制中心 湖南邵阳 422000）
摘要：目的 探讨副溶血性弧菌食物中毒的病原学检测的方法，并分析其原因，为快速准确的处理食物中毒事件提供技术方面的支持。方法 选取46例2018年5月食物中毒患者，以《食物中毒处理办法》中的相关规定为依据，开展流行病学的调查工作。采集标本对其中的致病菌进行分离鉴定，并对毒力基因进行检测，以脉冲场凝胶电泳（PFGE）对分离株进行分析。结果 本组患者的临床表现极为相似，本次所采集的标本中检出副溶血性弧菌16株（34.78%），其中15株的血清型别、毒力基因以及PFGE带型完全一致，结果判定，导致中毒的最大可能性为B餐厅的晚饭。结论 经过本次分析，本次食物中毒的原因是由副溶血性弧菌而引起的。对菌株的病原学结果进行分析，能够给感染性疾病的溯源提供重要的理论依据，但是要想进一步对感染的来源进行确定，就需要与流行病学的规律结合起来进行准确溯源。
关键词：副溶血性弧菌；食物中毒；病原学；检测；分析
副溶血性弧菌（VP）是一种革兰阴性的嗜盐性弧菌，其也是引起细菌性食物中度和急性腹泻的主要病原。VP主要存在与近海海域以及海产品中，在一些沿海地区，引起食物中毒的重要病原菌就是VP。临床上将脉冲场凝胶电泳（PFGE）作为细菌分子分型的“金标准”，其不但有较强的分辨力，还有较好的重复性，在食源性疾病的溯源和流行病学的研究方面极其重要 [1]。在2018年5月，我市某餐厅发生了一起食物中毒事件，现将本次研究内容报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料
选取46例2018年5月食物中毒患者。本组患者每天的大便次数≥3次或者呕吐次数≥1次，对采集到的患者的标本进行病原学检测，当结果显示存在VP，则判定为食物中毒。本次研究中对46例食物中毒的患者均进行了标本的采集，其中包括24份呕吐物、肛拭子等标本，7份为本餐厅员工的肛拭子标本，9份为可疑食品标本，5份为可疑食品制作工具的涂抹标本。
1.2本次研究所用到的仪器以及试剂
检测系统、全自动电泳仪、实时荧光PCR仪、脉冲凝胶电泳仪。增菌和分离培养基[生产企业：北京陆桥]、食源性病原菌14重PCR检测试剂盒[生产企业：北京ABT]。
1.2方法
病原学的筛查以及分离鉴定：将本次收集到的肛拭子标本直接接种在弧菌、志贺菌显色培养基中进行培养，血平板琼脂、Baird-Parker培养基、MYP、SS、琼脂等用于VP、志贺菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌以及变形杆菌分离培养。采用生理盐水制成样本悬液后将其中的DNA成分提取出来，然后用14重的PCR检测试剂盒对PCR进行扩增，进行初步的筛查。与此同时，将标本接种SC、志贺菌增菌肉汤、7.5%的NaCI肉汤、GN肉汤等进行增菌培养红后对其中的PCR进行筛查、分离以及鉴定。其中以GB4789为依据进行病原菌的分离培养，以WS/T 9-1996为依据进行生化知识鉴定，以WS/T 82-1996为依据进行血清学的分型[2]。
PFGE的分析：以Pulse Net Chinad的副溶血性弧菌PFGE为依据对菌株进行详细的分析，从TSA平板上将菌落挑取出来，将其制成麦氏度为4.3的CSB菌悬液，然后灌制凝胶块，待酶胶块裂解或者酶切后进行电泳，带染色后及时拍照，然后对结果进行聚类分析。在本次试验中，将电泳的参数调整为低分子量78 kb，高分子量396 kb，电泳进行的时间为19 h，脉冲时间为10～35.01 s，然后在其中加入3.8μg/L的硫脲。将本次电泳得到的图像用BioNumer-ics6.6.6.4软件进行聚类和分析，并以沙门菌H9812为参考标准[3]。
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2结果
2.1流行病学调查
本次为一旅游团，共96人，在2018年5月15日达到大连，在中午12：00在A餐厅用餐，晚上18：00在B餐厅用餐，当晚入住C酒店，16日早上7：00在C酒店用餐，8：30后有人感觉腹部不适，而后陆续出现了腹痛、腹泻等病人，到10：00到发病高峰期，共有46人（47.92%）发病，对本次所采集的标本中检出副溶血性弧菌16株（34.78%），与VP食物中毒的主要特征相似。由于此种菌的平均潜伏期是10～18 h，因此，引起中毒可能性最大的是B餐厅的晚餐。
2.2实验室检测
对本次所采集到的42份标本进行检测后，结果显示有检出副溶血性弧菌16株（34.78%）。其中15株的血清型别O3：K6、毒力基因以及PFGE带型完全一致，除了B餐厅所检测出来的刀具拭子菌株为toxR+、tdh-外，其余均为toxR+、tdh+，除此以外，并未检出其他类型的病原菌。
2.3PFGE分析
本次所检出来的16株（34.78%）副溶血性弧菌，对其DNA经过内切酶酶切和电泳后，采用BioNumer-ics6.6.6.4软件对电泳带型进行聚类和分析后，结果显示，只有015菌株带型不同，其余15株均属于同一种带型。
2.4结果判定
经过本次研究发现，以患者的临床表现特征、潜伏期、流行病学以及实验室检查结果为依据，判定出这是一起由VP引起的食物中毒事件，最为可疑的中毒餐为5月15日B餐厅的晚餐。
3讨论
本次食物中毒事件共有46例人发病，发病率为（47.92%），参照患者的临床表现特征、潜伏期、流行病学以及实验室检查结果等，判定出这是一起由VP引起的食物中毒事件，但是由于采样人员并未在B餐厅采集到标本，只能怀疑5月15日B餐厅的晚餐中毒餐。本次检测出来的16株（34.78%）副溶血性弧菌，其中有15株与C酒店的血清型、毒力基因、PFGE带型基本一致，因此说明两者之间存在着高度的同源性[4]。但是从VP的潜伏期、标本检测结果又可以发现，C酒店早餐发生感染的几率非常小，加上从B餐厅所检测出来的刀具拭子菌株为toxR+、tdh-与其他标本toxR+、tdh+存在差异，这也进一步说明了B餐厅刀具上存在VP。所以，在进一步对感染的来源进行确定，就需要与流行病学的规律结合起来进行准确溯源，这也为感染性疾病的溯源分析提供了重要的依据[5]。
总之，近年来，发生食物中毒的事件屡见不鲜，尤其在沿海城市，相关部门要加强对食品安全的宣传和培训，提高人们对食品安全的意识和防范能力，同时还要加强食品生产者的责任和法制意识，要购买新鲜的食品原料，将其放在低温下储藏，加工时要煮熟，餐具也要及时消毒，将VP引起的食物中毒事件降到最低。
参考文献
[1]杨柳青，欧新华，王岚等.长沙地区8起副溶血性弧菌食物中毒的病原学特征分析[J].现代预防医学，2018，45（08）：1392-1394+1412.
[2]刘思超，罗泽燕，徐励琴等.一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析及分子分型溯源研究[J].华南预防医学，2018，44（02）：128-133.
[3]陈泽辉，蔡薇，李莉.一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学检测和溯源分析[J].海峡预防医学杂志，2017，23（05）：87-89.
[4]张甜.一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析[J].中国城乡企业卫生，2017，32（01）：8-10.
[5]方叶珍，蒋雪凤，徐丹戈等.一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析[J].浙江预防医学，2016，28（01）：68-70+84.
论文作者:李广兵
论文发表刊物:《航空军医》2018年14期
论文发表时间:2018/10/26
标签：弧菌论文; 食物中毒论文; 病原学论文; 标本论文; 溶血性论文; 电泳论文; 餐厅论文; 《航空军医》2018年14期论文;