1延边大学附属医院检验科 吉林延吉 133000；2北华大学附属医院检验科 吉林吉林 132000
摘要 目的 比较SysmexXN-1000血液分析仪荧光法（PLT-F）和阻抗法（PLT-I）检测低于参考下限血小板的准确性，探讨PLT-F对血小板假性减低的应用意义。方法 将血小板减低标本分为低值组和中低值组，应用PLT-F、PLT-I模式检测220例血小板减低标本，通过人工镜检法进行血小板计数和形态学检查，以镜检法为参考方法，对检测结果统计分析。结果 PLT-F计数结果与参考方法比较相关性优于PLT-I。PLT-F大血小板报警提示特异性84.1％，灵敏性68.8％；PLT-I大血小板报警提示特异性则为73.2％，灵敏性为76.1％。PLT-F血小板聚集报警提示特异性85.1％，灵敏性100.0％；PLT-I血小板聚集报警提示特异性则为90.8％，灵敏性为72.0％。结论 与PLT-I相比，PLT-F对血小板减低标本检测具有更高的准确性；PLT-F报警信息对提示血小板假性减低具有重要意义。
关键词：荧光染色法；电阻抗法；血小板假性减低；评价研究
Application of fluorescent staining on platelet pseudo-reduction by XN-1000 hematology analyzer
HAN Caijun 1，ZHAO Wantao 2，YOU Xi 1
（1 Department of Clinical Laboratory，the Affiliated hospital of Yanbian University，Jilin Yanji，133000；
2 Department of Clinical Laboratory，the Affiliated hospital of Beihua University，Jilin Jilin，132000）
Abstract：Objective The result of Platelet count lower than reference range with SysmexXN-1000 PLT-F and PLT-I were compared，the significance of platelet alarm information in platelet pseudo-reduction counting was evaluated. Methods Platelet decreased samples were divided into low Platelet count group、low and medium Platelet count group. The total 220 blood samples were detected with XN-1000 hematology analyzer. In the meantime，blood smears were reviewed，and the results were analyzed statistically. Application of platelet alarm information on platelet pseudo-reduction is evaluated. Result Groups of counting results of PLT-F with the reference correlation method are better than PLT-I of that. The specificity of large platelet alarm prompt by PLT-F was 84.1%，the sensitivity was 68.8%；the specificity of PLT-I was 73.2%，the sensitivity was 76.1%. The specificity of platelet aggregation alarm prompt by PLT-F was 85.1%，the sensitivity was 100.0%；The specificity of PLT-I was 90.8%，the sensitivity was 72.0%. Conclusion The PLT-F is more accurate than the PLT-I in test of the sample of platelet decreased samples，and the alarm information of PLT-F are great significant to prompt platelet pseudo-reduction caused by platelet aggregation.
key words：PLT-F；PLT-I；Platelet pseudo-reduction；Evaluation studies
血小板检测是医学实验室检测的常规指标，其计数值易受多种因素影响。美国和欧洲的血液学标准制定委员会推荐血小板减少患者输注血小板的阈值为10×109/L，因此如何提高血小板计数的检测水平已受到广泛的关注[1]。在临床检验工作中，血小板假性减低常造成临床的误判，给临床诊疗带来麻烦，目前常规应用的血小板计数方法有电阻抗法（PLT-I）、光学法（PLT-O）、荧光染色法（PLT-F），有报道荧光染色法在低值血小板检测中具有更高的准确性[2]，但荧光法对血小板假性减低检测的意义未见报道。本研究以镜检法作为参考方法，探讨SysmexXN-1000荧光法及其报警信息对提示血小板假性降低的应用价值。
1资料与方法
一、研究对象
1.一般资料：220例血标本（PLT-F<100×109/L）来自2016年1月至2016年3月我院门诊和住院患者，分为低值组（PLT<50×109/L）和中低值组（PLT介于50～99×109/L）。
2.仪器与试剂：SysmexXN-1000血液分析仪以及配套试剂。Olympus CX-21双目显微镜。BD公司静脉用EDTA-K2真空抗凝管。血小板稀释液（草酸铵法）按《全国临床检验操作规程》第三版的要求配制，4℃保存。瑞氏-姬姆萨染色液（珠海贝索生物技术有限公司）。
二、方法
1.样本采集与检测：坐位采集静脉血，收集在EDTA-K2的真空采血管内，室温保存。所有标本均采用PLT-I和PLT-F两种进样检测模式并记录相关报警信息，采集6h内检测结束。血小板按照《全国临床检验操作规程》第三版的操作要求，手工计数两次，取两次计数均值[3]。每份标本，同时制备2张血涂片，写好编号；用瑞氏-姬姆萨染色液进行染色，然后由有工作经验的检验人员按照标准操作程序（血涂片检测SOP文件）进行镜检。
2.涂片镜检阳性及仪器报警提示判断标准：油镜下的细胞形态异常判断标准：①小红细胞：直径小于6μm②细胞碎片：各种不完整形状的细胞碎片③血小板凝集：血小板5个以上成堆④大血小板：直径4-6μm⑤巨大血小板：直径6μm以上[4]；仪器报警提示判断标准：①PLT直方图曲线右侧右移，分布低而宽，部分图形尾部上翘，仪器报警提示“PLT Abn Dst”，考虑存在大血小板②仪器报警提示“PLT Clumps”，考虑存在血小板聚集[5]。
三、统计学处理 采用SPSS17.0统计软件分析，组间两两比较采用LSD-t检验；相关性用Pearson相关分析；一致性用回归方程及相关系数（r）表示；以p<0.05为有统计学意义。灵敏性=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%；特异性=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%。报警信息的评价以灵敏性、特异性来表示。
2 结果
2.1 一致性评价 镜检法血小板计数介于（2-97）×109/L之间，低值组PLT-F和PLT-I与显微镜法的相关系数r分别为0.893﹑0.705（P<0.05，P<0.05），见图1；在中低值组r分别为0.925﹑0.886（P<0.05，P<0.05），见图2。提示PLT-F的准确性优于PLT-I，特别对低值血小板计数。低值组PLT-I和显微镜法的线性回归散点图中，有二个明显的离群点，形态学分析发现这2例标本存在细胞碎片。
图2 中低值组两种血小板计数方法与显微镜法的相关性
2.2大血小板标本检测方法间差异的比较
镜下形态学观察有61例大血小板标本，其中巨大血小板5例。3种方法对61例大血小板标本的检测结果比较：见表1。显示PLT-F与参考方法即显微镜法比较，差异无统计学意义（p>0.05）。PLT-I计数结果低于显微镜法（p<0.05），差异有统计学意义。
2.3 PLT-F与PLT-I的血小板报警信息提示对血小板假性减低的应用比较
根据我国血液学复检专家制定的镜检血小板阳性判断标准，对220例标本数据进行统计分析，PLT-F对大血小板报警提示假阳性率为11.4％（25/220），假阴性率为8.6％（19/220）；PLT-I大血小板报警提示假阳性率为21.8％（48/220），假阴性率为6.8％（15/220），可见，PLT-F的报警提示减少了灵敏性，却相应的提高了特异性。PLT-F对血小板聚集报警信息提示假阳性率11.4%（25/220），假阴性率0（0/220）；PLT-I对血小板聚集报警信息提示假阳性率8.2%（18/220），假阴性率3.2%（7/220），可见，PLT-F报警提示灵敏性为100%，即只要是镜检阳性的标本均有仪器报警提示，无1例漏诊。（表2）
3 讨论
显微镜手工法是WHO推荐的血小板计数的参考方法[6]；血涂片染色镜检可直接观察血小板的分布和体积大小[7]。血液分析仪检测原理不同致使仪器对细胞形态的识别能力存在差异。PLT-I采用电阻抗原理，根据电阻变化将2fL至30fL范围内的颗粒定义为血小板，因此电阻抗法不能很好的识别大血小板、血小板聚集等引起假性减少以及细胞碎片和小红细胞等引起假性偏高；而PLT-F通过使用血小板特异性的恶嗪染料对细胞内核酸染色，明确区分血小板和其他细胞，这符合文献中荧光染色法性能优于电阻抗法的方法评价[8-10]。在一致性验证中，低值组PLT-I和镜检法的线性回归散点图中，有二个明显的离群点，标本分别来自急性早幼粒细胞白血病和弥散性血管内凝血综合征（DIC）的患者，镜下可见细胞碎片及核影，这符合血细胞碎片干扰了PLT-I的计数而导致的假性升高，这与文献报道一致[11]。
造成血小板减少的因素较多，包括真血小板减少（由各种临床疾病所引起）和假性血小板减少（如抽血不当、血小板聚集、巨大血小板等），在临床检验工作中经常发现血小板计数结果与临床诊断明显不符，出现假性血小板减少的现象。在血小板聚集标本中，EDTA依赖性血小板减少症（EDTA-PTCP）发生率最高，发生原因及其复杂，临床报道发生率大约为0.07%～0.20%；采血原因导致的血小板聚集可通过强化业务技能，遵循操作规定而降低[12]。
血小板聚集极易造成误诊、误治，因此及时发现并处理，为临床提供准确的检测结果非常重要。通过对仪器报警提示分析，PLT-F能准确识别各种程度的血小板聚集，PLT-F报警提示灵敏性为100%，即只要是镜检阳性的标本均有提示，所以相较于PLT-I报警信息的提示，PLT-F可提高血小板聚集的检出率。PLT-F对大血小板报警提示减少了灵敏性，却相应的提高了特异性，虽然两种方法对于大血小板标本的报警特异性和灵敏度差异不明显，但63例大血小板标本显微镜间接计数的结果与PLT-F结果一致，且差异无统计学意义，所以对于大血小板标本通过可靠性更高的方法PLT-F检测，可得出更接近真值的血小板计数结果以便于指导临床诊疗。所以，对于血小板减少或者直方图异常报警的标本，合理使用PLT-F报警提示，并结合镜检，能有效避免血小板假性减低引起的诊疗失误[13，14]。
综上，本研究发现PLT-I抗干扰能力不如PLT-F，PLT-F极大地弥补了PLT-I检测大血小板样本的不足，提高了血小板检测的准确性，准确使用PLT-F报警信息提示对及早发现并纠正血小板假性减低有明显意义。
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作者简介：韩才均，男，1984年12月出生，检验师，医学硕士，主要从事临床血液学检验，
通讯作者：尤昕，主任技师，医学博士，硕士生导师.
论文作者:韩才均,赵万韬,尤昕
论文发表刊物:《健康世界》2017年第4期
论文发表时间:2017/4/24
标签：血小板论文; 标本论文; 提示论文; 特异性论文; 阳性论文; 方法论文; 灵敏性论文; 《健康世界》2017年第4期论文;