江苏省丰县人民医院 江苏丰县 221700
摘要 目的：通过研究聚凝胺试剂交叉配血的原理，探讨聚凝胺配血的影响因素并提出解决方案。方法：统计分析6000例输血患者中32例聚凝胺配血不合试验操作，分析患者病情，结合直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查、吸收放散试验，与微柱凝胶卡式抗人球配血方法比较。结果：聚凝胺试剂交叉配血不合病例32例，血浆自身抗体7例、冷凝集素6例、肝素2例、高蛋白血症6例、患者红细胞DAT阳性4例、血型鉴定错误2例、操作不规范5例；结论：聚凝胺试剂交叉配血影响因素较多，需严格操作按照标准规程，结合患者病因，针对性找出解决方案。
关键词：聚凝胺 交叉配血 原理 影响因素
输血是一种通过静脉血管将血液成分输入患者体内的方法[1]。交叉配血的目的，不仅检查血型鉴定的错误、不配合的IgM抗体，还应尽可能多的检出不配合的IgG抗体，最大限度的减少抗体的漏检。输血、妊娠是刺激机体产生IgG抗体的主要途径[2]。聚凝胺（Polybrene)是一种季胺盐阳离子聚合物，溶解后带有大量正电荷。唾液酸是高等生物中常见的酸性单糖[3]，大量存在存在于细胞表面[4]，通过Polybrene中和红细胞表面负电荷，降低红细胞膜zeta电位，同时低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位，增加抗体附着速度和连接数量[2]，缩小红细胞间距，促进红细胞发生聚集；当血浆中存在针对红细胞血型抗原的血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，发生特异性的凝集反应，在加入重悬液消除聚凝胺的正电荷，恢复红细胞表面电荷后，凝集不散开；如果血浆中不存在不配合血型抗体，凝集散开，则为非特异性凝集，此过程是可逆的。
1.资料与方法：
1.1一般资料 2015年5月至2018年4月，6000例门急诊、住院患者输血标本， EDTA－K2抗凝血液标本3ml。
1.2仪器和试剂
贝索血型血清学专用离心机 ，奥林巴斯显微镜，37℃和56℃恒温水浴箱，珠海贝索聚凝胺试剂盒，包括低离子介质溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四乙酸-2钠、聚凝胺溶液（Polybrene）、重悬液（Resuspending）：含柠檬酸钠。阳性对照血清：含抗D血清、阴性对照血清：含AB血清，不含红细胞血型抗体；戴安娜全自动血型/配血系统、Coombs微柱卡、乙醚。
1.3操作方法
按照试剂盒说明书和《全国临床检验操作规程》[5]操作。
2.结果 6000例输血患者标本，聚凝胺配血32例不合，加做微柱凝胶卡式抗人球配血试验并比较，微柱凝胶卡式抗人球配血不相合23例，统计数据见下表。
3.分析与处理：
32例聚凝胺配血不合病例中，选择微柱凝胶卡式抗人球法作对照，配血结果以凝集和溶血两个标准判断分析。配血方法不合时，应检查标本和血型错误，是否亚型、含有自身抗体或/和同种抗体并了解患者病情等。
3.1血型鉴定两例错误原因为操作不规范，未使用显微镜观测，漏检弱阳性结果、经验不足，把缗钱状凝聚误报告为阳性。影响血型鉴定的因素，有患者血型抗原和血浆血型抗体减弱、标准血清保存不当、抗原抗体比例不合适、类B抗原和磺胺类药物等。亚型红细胞抗原性较弱，可通过亚型定型试剂来具体鉴定；红细胞抗原形成不足或敏感性降低，如新生儿、老年人及少数恶病质患者，加用抗H和抗AB型血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质，必要时作吸收放散试验以确定；革兰氏阴性菌感染，血型反定型表现常为阴性[6]，通过询问病史，酸化抗-B血清，以及唾液血型物质检测，排除类B血型，找到血型鉴定错误原因。
3.2 正常人血清冷凝集素效价不高，且在4℃以下时才有活性。但在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷凝集素可异常增高。若室温环境<15℃，使用聚凝胺配血，冷凝集素会因Polybrene而加强，建议使用LIM配制的红细胞悬液加待检血清直接离心进行盐水对照试验，如果在盐水法试验中发现有冷凝集，则将Polybrene试验结果置37℃水浴箱1分钟后摇匀判读，冷凝集会散开，真凝集会有所减弱但不会散开。
3.3自身抗体可凝集自身红细胞及所有人的红细胞。通过吸收放散试验对红细胞上结合的抗体处理，确定抗体的特异性。血标本排除采集质量后如有自凝现象且红细胞比容较低,则放入37℃孵育后观察血凝块是否能散开,如不散开有可能是高效价温自身抗体导致。处理方法是先把放散自身红细胞上的抗体,用自身红细胞吸收血清中的自身抗体,进而检测同种抗体。如果抗体属于同种抗体，则交叉配血时应选取该抗原阴性的献血者的血液。如果该抗体无法确定特异性，则交叉配血时要根据患者自身红细胞与自身血清的对照反应选取较弱反应的献血者洗涤红细胞。
3.4操作不规范导致错误的配血结果5例中，红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，易误判为阴性反应；弱的凝集未通过显微镜观测，造成阳性结果漏检，如直抗阳性标本，聚凝胺相合而微柱凝胶卡不相合；随意多加聚凝胺导致重悬液无法充分解散非特异性凝集，出现假阳性。
3.5肝素有中和红细胞的作用，如使用肝素抗凝的血浆配血，需多加Polybrene中和肝素；加Polybrene后立即以1000×g离心10秒，观察是否有凝集；如果阴性则继续试验，如果阳性，需分析原因排除干扰或错误后继续后续试验[5]。两例标本含有肝素（洗肾患者），多加4~6滴Polybrene以中和肝素后凝集消失。
3.6 某些肝病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等患者标本有可能造成聚凝胺配血不和，由于多发性骨髓瘤患者血浆内出现异常的免疫球蛋白（M蛋白），影响红细胞表面负电荷状态，使红细胞产生缗钱状凝聚；肝硬化患者由于球蛋白产生增多，白蛋白下降，造成白蛋白与球蛋白比例导致失调，使红细胞产生凝聚。当患者红细胞直接抗人球蛋白试验（DAT）阴性时，用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消失。
4.总结 聚凝胺试剂是目前最常用的交叉配血输血前检测，具有灵敏度高、简便快速等优点，能检测出几乎所有血型抗体。与微柱凝胶卡抗人球试验比较，聚凝胺配血法影响因素较多，且对抗-K敏感性低，对只用聚凝胺的输血科应加做辅助性抗人球蛋白试验，以减低溶血性输血反应的风险。工作中，只有加强质量管理，严格按照标准操作规程，了解患者病情，结合DAT、血型抗体筛查试验、DAT、IAT和吸收分散试验等，就可以排除干扰，找到正确解决方案。
参考文献
1.李月琴.低离子聚凝胺技术在输血检验中的应用价值[J] 临床研究 2016 14(5):182
2.胡丽华.临床输血学检验技术 北京.人民卫生出版社 2015. 7
3.程铖, 高春芳. 唾液酸的生物学意义及其在肝病中的研究进展.检验医学. 2013, 28(4): 333-336
4 沈清清,田洪,陈红惠等. 唾液酸与唾液酸识别蛋白研究进展文山学院学报,26（6）,2013.12
5 尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程【M】4版,北京:人民卫生出版社,2015 .139
6.刘景汉,汪德清.临床输血学 北京人民卫生出版社 2011.267
论文作者:程峰 王洪雷
论文发表刊物:《临床医学教育》2018年11期
论文发表时间:2018/11/17
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