（黑龙江中医药大学佳木斯学院 黑龙江 佳木斯 154007）
【摘 要】目的：观察五虫汤对脑缺血大鼠血清NO和血浆ET的影响，探讨五虫汤对局灶性脑缺血大鼠的作用机制。方法：50只成年SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、五虫汤高剂量组、五虫汤低剂量组和西药对照组5组，采用改良的颈内动脉栓线法制备脑缺血模型大鼠。3个药物组分别给予尼莫地平0.5μg/（g?d）、高剂量20mg/（g?d）和低剂量5mg/（g?d）五虫汤水煎液治疗6周，测定ET、N0等生化指标。结果：与模型对照组比较，用药的3组ET、NO含量均降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。五虫汤高、低剂量组间比较，高剂量组血浆 ET量低于低剂量组且P＜0.05，有统计学意义。结论：五虫汤可以降低血浆ET、血清NO的含量，可能是其抗脑缺血损伤的机制之一
【关键词】五虫汤； 脑缺血大鼠； ET、N0
【中图分类号】R743.31 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）7-0004-02
缺血性脑血管疾病是指由于在脑血管的血管壁病变或在血流障碍的基础上发生脑血液供应障碍，使得相应的脑组织由于缺血、缺氧出现坏死或软化，并引发短暂或持久的局部的或弥漫性的损害，引起一系列神经功能缺损症候群。是临床常见病、多发病，其致残率和致死率均很高，是严重威胁人类生命健康的一类疾病，是目前重点预防和治疗的一种疾病[1]。这类病变发病机理非常复杂，尚未完全阐明，临床也无理想的有效药物，本文旨在通过对自拟五虫汤抗脑缺血性损伤的保护作用的研究，进一步探讨其治疗脑缺血的作用机制，为寻找更好的抗脑损伤的保护剂提供理论依据。
1 材料与方法：
1.1实验动物：
健康成年雄性SD大鼠50只(购于佳木斯大学实验动物中心)，体重约250～300g。
1.2 药品与试剂：
五虫汤由水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣、土鳖虫、丹参、川芎等组成（黑龙江中医药大学佳木斯学院附属医院制剂室提供）,生药含量1g/ml;尼莫地平片（上海信谊嘉华药业有限公司）；ET试剂盒（东亚免疫试剂所）、水合氯醛（青岛宇龙海藻有限公司）， N0试剂盒（南京建成生物工程研究所）
1.3实验分组：
将50只大鼠随机抽取分为5组，每组10只。一组不造模为空白对照组，造模不治疗的是模型对照组，以尼莫地平治疗的叫西药对照组，给20.0g生药/kg治疗的为五虫汤高剂量组、给5.0g生药/kg治疗的为五虫汤低剂量组。
1.4动物模型制备：
参照文献方法Longa[2-3]报道的颈内动脉栓线法并予以改进。手术前禁食12h，自由饮水。大鼠称重后，10%水合氯醛按3.5ml/kg由腹腔注射进行麻醉。麻醉平稳后，把大鼠仰卧固定在手术台上。颈部除毛，碘伏消毒。沿颈部正中切口，剪开浅筋膜，暴露一侧胸锁乳突肌，钝性分离，暴露一侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）和翼腭动脉，在CCA深面穿过一根细线，钝性分离ICA、ECA。颈外动脉的分支甲状腺上动脉、枕动脉用电凝器烧断。游离出ECA约3～4mm，从深面穿一条细线，结扎ECA。分离颈部动脉、迷走神经及翼腭动脉，并结扎CCA，不结扎翼腭动脉，绕ICA穿线备用，沿CCA分叉处切口向ICA方向插入鱼线，以CCA分叉处作为起始标记，深度为（18.0±1.Omm），插入至稍感阻力后，扎紧备线，制成大鼠局灶性脑缺血模型，切口滴加青霉素钠溶液抗感染，逐层缝合。术中保持体温在37±0.5℃。待大鼠清醒后用Zea longa神经功能学评分进行模型效果评价。
1.5 给药：
大鼠造模成功后，单笼喂养，自由饮食水一周，每日进行健康观察。第八天开始灌胃给药，每日一次。具体如下：空白对照组每日普通饮食，自由饮水；模型对照组选用剂量为10μL/（g?d）生理盐水灌胃;西药对照组尼莫地平液0.5μg/（g?d）; 五虫汤低剂量组五虫汤水煎液5mg/（g?d）; 五虫汤高剂量组五虫汤水煎液20mg/（g?d）。共连续用药6周。
1.6观察方法：
给药6周后，大鼠股动脉采血7～8ml。立即取1.5 ml血注入事先预冷并加有0.3mol/ L抗凝剂和抑肽酶的EDTA-2Na溶液的子弹头管，混匀，选3000r/min转速低温离心，保存血浆（＜20℃），待测ET ；剩余血液用3000r/min低温离心后取血清，保存在20℃以下，待测NO。按试剂盒说明书使用ET和N0试剂盒测定血浆ET、血清NO的含量。
1.7统计学方法：
实验数据均采用 x±s 表示，用SPSS20.0软件进行统计，组间用t 检验进行统计处理。P＜0.05有统计学意义。
2 结果
与空白对照组比较，模型对照组血浆 ET、血清 NO浓度升高明显，P＜0.01有统计学意义。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆西药对照组、五虫汤低剂量组、五虫汤高剂量组与模型对照组比较ET、血清含量均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。五虫汤高剂量组、五虫汤低剂量组、西药对照组间NO水平对比无统计学意义（P＞0.05）。但五虫汤高剂量组与低剂量组间比较五虫汤高剂量组血浆 ET量低于低剂量组且P＜0.05，有统计学意义。
表1 对脑缺血大鼠血浆 ET、血清 NO的影响（x±S）
组别 动物数量ET（ng?l－1）NO（μmol?L-1）
空白对照组1086.83±6.2113.19±3.68
模型对照组1096.48±8.56 ＊＊ 24.71±4.95＊＊
西药对照组1091.33±6.77＊＊15.93±3.53＊＊
低剂量组1092.29±7.42＊＊#16.93±3.97＊＊
高剂量组1089.10±6.05＊＊#16.22±3.46＊＊
各组与模型组相比较# P＜0.05，＊＊P＜0.01.
3 讨论
脑缺血属于中医中风的范畴，中医理论认为，缺血性中风的病位在脑，与心、肝、脾、肾及经络、血脉密切相关。病机概论之有虚、风、火、痰、气和血六端，以肝为主，血瘀是核心。由于近年来,中风病的发病率逐年提高,对其发病机制的研究也越来越深入, 在临床实践的基础上许多学者结合现代医学理论及实验研究,提出:“血瘀是中风病发生发展的核心” [4]。大量临床与实验资料也进一步证实，中医药在脑缺血和脑梗死的预防及治疗方面均有一定疗效[5] 。
五虫汤治疗大鼠脑缺血，意在益气活血、化瘀祛痰、通经活络。地龙、全蝎、蜈蚣、土鳖虫属平肝熄风药，水蛭、丹参、川芎属活血化瘀药。地龙、水蛭破血逐瘀，通经活络，有增加脑循环、抗血栓的作用，且水蛭肽还有抗脑缺血，保护神经元，减轻神经损伤的作用；土鳖虫、全蝎祛风解痉通络，蜈蚣祛风散结通络；丹参、川芎补血、活血化瘀、活血行气、祛风止痛，具有抗缺血、缺氧的作用，对神经细胞具有保护作用，诸药合用，共奏祛风通络、活血化瘀之效。研究表明，川芎挥发油在脑组织缺血缺氧过程中，具有扩张血管，改善微循环和血液流变学[5] 。现代药理研究亦证实，以上诸药分别具有抗凝、溶栓、扩张血管、降低血压、改善微循环、增加脑循环、改善脑组织供血和脑组织代谢、促进受损脑组织功能恢复、加速侧支循环建立等作用，可以发挥抗脑缺血，保护神经元，减轻神经损伤的作用。其符合现代医学的治疗原则。
一氧化氮是一脂溶性的自由基气体，可以通过单纯扩散快速作用于血管平滑肌细胞，使其舒张，扩血管，降压；快速渗透入血液中血小板细胞，降低血小板活性，抑制其凝集粘附，调节脑血流量,对神经元有保护作用，防止血栓和动脉粥样硬化的发生。脑缺血损伤时，NO可通过多个环节来发挥它的不同的保护作用。但过量的NO有毒性作用，能损伤细胞，大量的NO在缺血部位能产生神经毒性。内皮素是一种内源性长效收缩血管的调节因子，广泛存在于血管内皮细胞和各种组织细胞中，是调节心血管功能活动的重要因子，有强大的缩血管作用，在维持血管基础张力与心血管活动稳态中起重要作用。研究表明，多种因素如组织缺氧，代谢增强及儿茶酚胺含量升高均可刺激前内皮素原转录，使内皮素生成和释放增多。内皮素发挥它的缩血管作用，缺血的组织血管也收缩，组织缺血缺氧进一步加重。本实验中，脑缺血性损伤后，血浆 ET、血清 NO水平均明显升高，五虫汤可以降低脑缺血性损伤ET和NO的含量，说明它可以减轻ET的收缩血管作用和NO的细胞毒性作用，发挥其对脑组织和神经细胞保护作用。这可能就是其抗脑缺血损伤的机制之一。
参考文献：
[1]刘青青. 脑缺血损伤机制的研究进展［J］中华中医药学刊，2012，6.
[2]Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S.Reversible middle cerebral artery Occlusion without craniectomy in rats.Stroke,1989，20(8)：84―91.
[3]包新杰. 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型的改进［J］中国脑血管病杂志，2011,8（5）：248-252.
[4]尚远宏，徐晓玉. 中药及其提取物对脑缺血保护作用的实验研究进展［J］中国中药杂志，2013，38（8）:1109.
[5]惠文. 川芎对脑血管疾病的药理作用［J］开卷有益: 求医问药，2012（1）:31
[6]盛艳梅. 川芎挥发油对大鼠大脑皮层神经细胞体外存活及脑缺血再灌注损伤的影响［J］时珍国医国药，2012,23（3）:536-538.
论文作者:孙,静,夏祥河,朱景鑫
论文发表刊物:《河南中医》2015年7月供稿
论文发表时间:2015/10/20
标签：脑缺血论文; 对照组论文; 大鼠论文; 动脉论文; 作用论文; 剂量论文; 血浆论文; 《河南中医》2015年7月供稿论文;