黑龙江中医药大学 哈尔滨 150040
摘要：目的 探讨观察人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠α-MHC，β-MHC（心肌肌球蛋白重链）表达的影响。方法 建立慢性心衰大鼠模型，并将其随机分成模型组、卡托普利组和GS+Ber组，另设正常对照组；1个月后通过荧光定量PCR对慢性心衰大鼠心肌肌球蛋白重链mRNA表达进行检测。结果 GS+Ber组α-MHC mRNA的表达明显高于模型组，β-MHC mRNA的表达明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 人参总皂苷合黄连小檗碱能够具有潜在慢性心衰治疗价值。
关键词：慢性心衰；人参总皂苷；黄连小檗碱；α-MHC；β-MHC
神经内分泌介导的心室重构是慢性心衰（CHF）基本机制，研究表明防治慢性心衰的重点是改善心肌生物学性能[1]。慢性心衰大鼠，α-MHC mRNA的表达将显著降低，同时β-MHC mRNA的表达将显著升高，心肌细胞出现由α-肌球蛋白重链向β-肌球蛋白重链的异常转化[2]。本研究通过对慢性心衰大鼠进行GS+Ber灌胃，观察其对α-MHC和β-MHC表达的影响，具体报道内容如下。
1.材料和方法
1.1材料
清洁级雄性Wistar大鼠（由本院动物实验中心提供）50只，体重为210~250g；人参皂苷（Rb1对照品）购自中国药品生物制品检定所；黄连小檗碱购自南京替斯艾么中药研究所；Go Taq qPCR Master Mix购自上海睿安生物科技有限公司；Trizol试剂购自 Invitrogen公司（美国）；卡托普利购自常州制药厂有限公司；异丙肾上腺素购自上海禾丰制药有限公司；红参、黄连为是市售（已成功提取出GS和Ber，并纯化）。
1.2方法
1.2.1建立动物模型及分组
随机选择40只大鼠，连续12天进行大量异丙肾上腺素（ISO）皮下多点注射，首日剂量为20mg∙kg-1，次日剂量为10mg∙kg-1，以后每日剂量为5mg∙kg-1。剩余大鼠作为正常对照组，采用等量蒸馏水皮下注射。通过检测造模大鼠与正常大鼠血流动力学相关指标，判断模型是否建立，将建模后大鼠随机分成模型组：以蒸馏水进行灌胃处理；卡托普利组：45ml∙kg-1∙d-1进行灌胃；GS+Ber组：20ml∙kg-1∙d-1灌胃。正常对照组采用蒸馏水灌胃处理，连续处理1个月。每组各12只大鼠。
1.2.2检测大鼠心肌肌球蛋白重链表达
具体检测步骤如下：①提取大鼠心肌细胞RNA并合成cDNA：取大鼠心肌组织50mg，采用超声破碎，根据Trizol试剂使用说明书提取总RNA，并使用OligdT15-18作引物反转录得到cDNA。②TaqMan水解探针和引物：根据α-MHC与β-MHC差异区，自行设计α-MHC、β-MHC及β-actin引物及探针，并由上海生工生物工程合成。③实时荧光定量PCR：体系为25μL，包括Go Taq qPCR Master Mix 12.5μL，引物（上下游）各1μL，探针和ROX Reference Dye 各0.5μL，和1μL cDNA，加灭菌蒸馏水补充至25μL，涡旋振荡混匀，并进行Real-time PCR，同时设置空白对照和阴性及阳性对照，模板分别为水和大鼠心肌细胞RNA及DNA，每个样品均重复三次，记录其CT值，数据通过2-ΔΔCT法分析。
1.3统计学方法
数据通过SPSS13.0软件进行分析。若数据方差不齐（或不符合正态分布），通过轶和检验以中位数M表示，当P<0.05时，差异在统计学方面有意义。
2.结果
如表1所示，GS+Ber组α-MHC mRNA的表达明显高于模型组，β-MHC mRNA的表达明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；卡托普利组β-MHC mRNA的表达明显低于模型组（P<0.05），其他差异不显著（P>0.05）。
3.讨论
人参和黄连均具有良好调和心脾功效，临床广泛使用人参与黄连配伍治疗慢性心衰。研究表明，GS对脂质代谢有一定调节作用，以起到抗动脉粥样硬化功能，同时可以有效保护心肌，使血流动力学改善以起到强心作用[3]。Ber对心衰的心脏可起正性肌力作用，有潜在慢性心衰治疗价值[4]。GS合Ber组方可发挥中医方剂配伍优势，适宜治疗脾虚痰热和慢性心衰等证。
研究结果表明，模型组大鼠α-肌球蛋白重链基因表达显著下降，β-肌球蛋白重链基因表达显著增加，表明具有慢性心衰较为严重。托普利和GS+Ber可显著下调β-MHC mRNA的表达，且GS+Ber还具有保护α-MHC的作用，在统计学上有意义（P<0.05），能够起到显著缓解心肌细胞由α-肌球蛋白重链向β-肌球蛋白重链的异常转化，对心肌细胞生物学性能有良好影响，从而起到治疗慢性心衰的作用。
参考文献：
[1]何艳，张恩浩，钟国强等.黄连素抑制慢性心衰大鼠心肌炎性反应[J].基础医学与临床，2013，33（6）：718-721.
[2]张艳，王思尹，任建歌等.益气活血中药对慢性心衰患者生活质量的RCT研究[J].中国循环杂志，2013，（z1）：226-227.
[3]付双全.人参的心血管作用药理学研究进展[J].长春中医药大学学报，2012，28（2）：357-359.
[4]杨勇，张保顺，曹春芽等.小檗碱的心血管药理活性[J].中成药，2011，33（5）：867-869.
作者简介：解颖，助理研究员，中药复方的活性物质研究。
通讯作者：陈忠新，中药复方成分提取研究。
论文作者:解颖,陈忠新（通讯作者）
论文发表刊物:《健康世界》2016年1期供稿
论文发表时间:2016/3/28
标签：心衰论文; 大鼠论文; 心肌论文; 球蛋白论文; 黄连论文; 模型论文; 人参论文; 《健康世界》2016年1期供稿论文;