王红星[1]2002年在《猪leptin长形受体mRNA在脑内的分布定位》文中进行了进一步梳理1 猪leptin长形受体(OB-Rb)目的基因的克隆及核酸探针的研制 根据Genebank上登录的leptin长形受体(OB-Rb)mRNA基因全序列，在其保守区设计一对引物。用Trizole法从长白叁元杂交猪的下丘脑提取总RNA，然后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法进行cDNA扩增，获得一条长343bp的目的基因片段，运用T-A克隆方法，将此片段连接到pGEM-Easy T载体，通过蓝白斑筛选、酶切和序列测定等方法进行重组质粒鉴定。最后的测序结果表明，获得的目的基因片段与发表的序列100％同源。用ApaⅠ和Sac Ⅰ酶使测序正确的重组质粒完全线性化后，以体外转录法合成OB-Rb反义和正义cRNA核酸探针，用斑点杂交法检测探针的浓度。检测结果表明，探针的浓度达到100ng／μl，满足杂交要求。 2 猪下丘脑内OB-Rb mRNA的分布定位 本实验用原位杂交法研究了5头2-3月龄长白母猪下丘脑OB-Rb mRNA的分布定位。研究结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核和室周核，在下丘脑外侧区也散在分布标记神经元。 3 猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA分布定位 本实验用原位杂交法研究了10头长白叁元杂交猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA的分布定位。研究结果表明，大脑皮质和梨状叶内的OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于Ⅱ-Ⅵ层，分子层偶见标记神经元。海马结构内的OB-Rb mRNA标记神经元主要位于海马的锥体细胞层和齿状回的颗粒层，在海马的始层和齿状回的多形层偶见标记神经元，在海马的辐射层和腔隙层罕见标记细胞。在杏仁核内，OB-Rb mRNA标记神经元主要见于皮质内侧核，在基底外侧核和中央核也有少量标记神经元。 4 猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位 本实验用原位杂交法研究了5头长白叁元杂交猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位。结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元在长白叁元杂交猪丘脑、小脑和延髓内均有分布。在丘脑内，OB-Rb mRNA标记神经元几乎见于所有核团，在中线核群、丘脑室旁核和丘脑前核群内出现大量的QB－Rb mRNA标i己神经元，其余核团 OBRb mRNA标记神经元分布较少。在小脑，皮质叁层中均有 OB－Rb mRNA标记神经元，以梨状神经元层和颗粒层分布密集。在延髓下橄榄核、孤束核、迷走神经副交感核和舌下神经核也有 OB．Rb mRNA标记神经元出现。 本文研究结果进一步肯定了别人在人、，啮齿类和羊上的研究结果丫丰富了脑内OB－Rb m洲A基因表达的资料，弥补了猪卤不同核团内 OB－Rb mMA分布定位资料的空白，为研究leptin的生物学作用及其作用机理提供了形态学基础，同时也为进一步研究OB－Rb与其它神经肽的共存关系奠定了基础。
樊明欣[2]2003年在《leptin长形受体mRNA与NPY和SS在猪前脑内共存》文中进行了进一步梳理1 leptin长形受体与NPY在猪前脑内共存 用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了5头叁元杂交仔猪前脑内leptin长型受体(OB-Rb)mRNA与神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明，leptin长型受体(OB-Rb)mRNA和NPY免疫反应阳性神经元分布于下丘脑漏斗核和前室周核、海马、杏仁核及大脑皮质。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有NPY免疫反应阳性物质，即leptin长型受体与NPY共存于同一神经元内。试验结果提示leptin可能通过下丘脑漏斗核和室周核以及边缘系统的海马和杏仁核，甚至大脑皮质中表达leptin长型受体mRNA的NPY免疫反应阳性神经元调节动物的摄食、能量代谢、生长和繁殖等活动。 2 leptin长形受体与SS在猪前脑内共存 用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了叁元杂交和梅山仔猪前脑内leptin长型受体mRNA与生长抑素(SS)免疫反应阳性物质的共存关系。结果表明，leptin长型受体mRNA和生长抑素免疫反应阳性神经元分布于下丘脑室周核、背内侧核、腹内侧核、室旁核、海马、杏仁核及大脑皮质，且在叁元杂交与梅山仔猪之间分布无明显差异。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有生长抑素免疫反应阳性物质，提示leptin可直接作用于下丘脑的生长抑素免疫反应阳性神经元调节动物的能量代谢、生长和繁殖等活动。
参考文献：
[1]. 猪leptin长形受体mRNA在脑内的分布定位[D]. 王红星. 南京农业大学. 2002
[2]. leptin长形受体mRNA与NPY和SS在猪前脑内共存[D]. 樊明欣. 南京农业大学. 2003