罗德全（哈药集团制药六厂 150056）
【摘要】双黄连口服液，主要成分是金银花、黄芩、连翘，本品具有疏风解表、清热解毒的功效，用于外感风热所致的感冒，症见发热、咳嗽、咽痛。中药制剂成分复杂在同一色谱条件下有许多杂质峰干扰主峰检测，使色谱图的主峰面积比实际峰面积大。造成样品浓度虚高的现象。按药典规定的方法，测定绿原酸含量检验周期长，准确度较低。本实验通过改善色谱分离条件，提高高效液相色谱法测定双黄连口服液绿原酸测定准确度。
【关键词】 双黄连口服液 绿原酸 HPLC法
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）35-0119-02
1 试剂和仪器
试剂：水、甲醇、冰醋酸；仪器：:岛津LC-20A高效液相色谱仪，梅特勒X205电子天平。
2 方法与结果
2.1 色谱峰不纯有两个原因及解决措施：（1）样品本身杂质峰未和主峰完全分离，解决措改变柱温 ，延长保留时间。（2）一针样品的杂质未在分析时间内洗脱下来，而在下一针分析时间内洗脱下来，和待测组分峰包裹在一起，解决措施：提高色谱分析的效率。
2.2通过优化色谱分离条件，可提高色谱分离的初始理论塔板数，进而提高色谱分析的准确度，并提高色谱柱使用寿命。可通过改变柱温，更换色谱柱，改变流动相有机相的比例，进样量来达到目的。经过实验过对改变流动相中有机相的比例、更换高校色谱柱、增加样品分析时间、进行梯度洗脱的研究，发现主要是改变柱温、进行梯度洗脱影响较大。
2.3 经实验得知，柱温这一色谱条件是决定色谱分离的决定因素，且32 ℃为最佳实验温度。
2.4 由于绿原酸在18分钟已经从色谱柱中洗脱下来，而最后一个组分则要80分钟才能吸脱下来，根据反相色谱分离原理，可以减小溶剂（流动相）极性来加速组分的洗脱。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆流动相的极性是将保证绿原酸良好分离和杂质快速洗脱的关键点。
2.5 在绿原酸出峰以前保持流动相为水-甲醇比例为80：20，在19分钟时调节流动相比例为100%甲醇。经试验得知在流动相换成100%甲醇8分钟后基线变得平稳，表示不关心的组分已经完全洗脱下来，在27分钟时将流动相在调回水-甲醇（80：20）。重新平衡色谱柱，监控检测器SAMP池能量，经过8分种后能量值恢复到初始状态。表明理论上可以进下一个样品继续分析了。这样就将原来的分析时间由80分钟缩短为40分钟了。
2.6 线性范围试验。取经减压干燥12小时的绿原酸对照品，精密称定，加水溶解转容后，分别制成浓度为7.984、15.968、23.952、31.936、39.92、47.904 、55.8888、63.872 、 71.856 、 79.84μg/ml的溶液，进样10?l，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标经回归，得线性回归方程Y= 3.868713e-008 X，线性相关系数γ=0.99999。结果表明：绿原酸在7.984-79.84μg/ml范围内，浓度同峰面积呈良好的线形关系。
2.7 最小检出量。精密量取线性项下的7.984 μg/ml浓度的对照品溶液 1ml，置于量瓶中，进样10 ?l,色谱分析显示，信噪比大于3 ，故最小检出量应为0.27μg/ml。
2.8 稳定性。取同一批双黄连口服液按已确定的色谱条件连续进样6次。结果RSD为0.17%，小于2.0%，符合要求。
2.9 重复性。取绿原酸对照液，按上述色谱条件连续进样6次。样品的实际浓度39.92μg/ml，6次样品的检验平均浓度39.9215μg/ml，检验浓度结果的相对标准差RSD0.002%（<2.0% ）， 符合要求。
2.10 回收率试验。以已知含量的样品为基液，加入对照品，做加样回收率试验，平均回收率为99.97%，RSD0.07%（<2.0% ），表明方法准确结果可靠。
2.11 样品稳定性考察。取口服液样品，分别在0、2、4、6、8、10小时后按上述色谱条件进样分析，RSD0.24%（<2.0% ），得出样品溶液在10小时内相当稳定。
3 讨论
通过改变色谱试验柱温为32℃，使用色谱柱使柱效提高为8000，大大高于要变标准6000，经过1000次试验理论塔板数还维持在7000。通过两种洗脱方式相结合，大大缩短了样品的分析时间由原来的80分钟缩短为40分钟 。经过方法学研究新方法样品浓度在10ug/ml~100ug/ml范围内浓度与峰面积呈一次过原点线性关系，相关系数0.99999。选同批样品制成六分样品，结果相对标准偏差0.17%<2%(国家标准)。选已知浓度的绿原酸对照液连续进样６次，结果相对标准偏差0.002%。取同批样品按《中国药典附录》做加样回收试验回收率为99.97%。口服液样品，分别在0、2、4、6、8、10小时后按上述色谱条件进样分析，得出样品溶液在10小时内相当稳定。
参考文献
[1]刘晶.张燕丽.付起凤.康毅华 金银花最佳采收期的研究，中医药信息2011(3)
论文作者:罗德全
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第35期供稿
论文发表时间:2014-2-19
标签：色谱论文; 样品论文; 浓度论文; 口服液论文; 甲醇论文; 条件论文; 组分论文; 《中外健康文摘》2013年第35期供稿论文;