摘要：目的 对比纸片法与多管发酵法在水质总大肠菌群检验中的价值。方法 选取本市25份自来水样和25份城市周边农村的生活饮用水，分别采用纸片法与多管发酵法进行检测，分析并对比两种检测方法的结果。结果 纸片法阳性检出率为14.0%，多管发酵法阳性检出率为18.0%，统计学方法处理两种检测方法的阳性率，差异无统计学意义，P>0.05。结论 纸片法与多管发酵法在水质总大肠菌群的检测中具有一致性，适应于检测水质总大肠菌群。
关键词：纸片法；多管发酵法；水质；总大肠菌群
[Abstract] objective：to contrast paper method and multiple tube fermentation the value of total coliform bacteria in water quality inspection.Methods：selecting the city tap water samples and 25 cities surrounding rural drinking water，25 were tested by using pieces of paper with multiple tube fermentation，analyzed and compared the results of the two methods of testing.Results：the positive rate paper method was 14.0%，positive rate multi-tube fermentation was 18.0%，positive predictive value of statistical methods to deal with two kinds of detection methods，there was no statistically significant difference，P > 0.05）.Conclusion：the method of paper with multiple tube fermentation has consistency in quality detection of total coliforms，adapted to detect water quality total coliform bacteria.
[Key words] paper method；Multiple tube fermentation；Water quality；Total coliform bacteria
总大肠菌群是水环境质量评价的重要卫生指示菌之一，检测检验水质总大肠菌群对于维持良好生态环境及保障人体健康具有重要意义[1]。目前，我国地表水大肠菌群含量较高，部分水域甚至已经超过V类水质标准数的一万倍以上。我国的微生物指标检测还处于发展阶段，主要以常规理化指标检测为主，但微生物指标检测还需进一步加强。目前，水质总大肠菌群的检测检验中，最为常用的传统检验方法是多管发酵法及纸片法。多管发酵法不受浊度影响，可检测浊度较大污水水样。纸片法培养时间会直接影响阳性管率，适合检测污染程度低的水样，且检测速度较快，工作效率可显著提高[2-3]。本次实验主要对比纸片法与多管发酵法在水质总大肠菌群检验中的价值。
1 资料与方法
1.1 样本
2017年4月10日选取本市25份自来水样和25份城市周边农村的生活饮用水，其中农村饮水安全工程10份，农村学校自备水8份，农户自备井水7份，本组水样一共50份。
1.2 检验材料
①纸片法：3M纸片（3M Petrifilm Aerobic Count检测纸片），每份五袋吸附十毫升水样的大纸片，规格为11×11cm双层，十袋吸附一毫升水样的小纸片，规格为5×5cm双层。干燥纸片是淡绿色或者灰白色，加入水样后呈现青紫色。②多管发酵法：杭州天和生物技有限公司，乳糖蛋白胨培养基；自制双料乳糖蛋白胨培养液；自制单料乳糖蛋白胨培养液；杭州天和生物技有限公司，伊红美蓝琼脂平板；革兰氏染液；无菌生理盐水。
1.3 原理及检测方法
1.3.1 多管发酵法
主要根据总大肠菌群特有的生物特性，如革兰氏阴性无芽孢，在二十四小时内、37摄氏度能够发酵乳糖，且会产气产酸，并在选择性培养基上留意典型菌落。在进行实验前，配制大量选择性培养基、复发酵、初发酵。多管发酵法根据国家标准及《水和废水监测分析方法》进行操作，即包含乳糖发酵证实试验（复发酵）、平板分离培养、乳糖胆盐发酵试验（初发酵）。
1.3.2 纸片法
工作原理为采用纸片上营养，促使大肠菌群快速生长并繁殖，进而分解乳酸并产生酸，酸可促使溴甲酚紫指示剂由天蓝转变为黄色，在此区域内的大肠菌群产生的脱氧酶，会使纸片上基质进一步分解脱氢，并转给受体氯化三苯四氮唑，氯化三苯四氮唑接受氢后，会由无色转变为红色物质三苯甲胺，且其溶于水。两种检测方法相似，实验接种量也与多管发酵法相同。
1.4 观察指标
观察并记录2种检验方法的阴性结果及阳性结果。
1.5 统计学方法
采用统计学软件SPSS 20.0 处理实验数据，计数资料行卡方检验。以P<0.05表示比较差异有意义。
2 结果
2.1 两种检测方法之间的差异检测结果
50份水样中，经纸片法及多管发酵法检测，纸片法检测阳性而多管发酵法检测阴性样品数有3份，多管发酵法检测阳性而纸片法检测阴性样品数有4份。
2.2 两种检测方法阳性率
对比两种检测方法结果 纸片法阳性检出率为14.0%，多管发酵法阳性检出率为18.0%，统计学方法处理两种检测方法的阳性率，差异无统计学意义，P>0.05。
表1 两种检测方法之间的差异检测结果
3 讨论
大肠菌群是引发肠道疾病的主要指示菌，其也是监测餐具等生活用具及食用水源是否被粪便污染的标准之一。饮用水若被大肠菌群污染，一旦人体食用了污染的饮用水，会对身体健康造成极大影响。在我国的食品卫生检测内容中，主要检测对象的指示菌是大肠菌群。目前，生活饮用水常采用多管发酵法及纸片法进行检测。
多管发酵法是较为常用的检测方法，不足之处在于操作复杂，配制营养基及清洗工作量较大，占用时间长，阻碍了卫生监督工作效率。为了克服传统检测方案的不足之处，人们开始关注寻找更为简单有效的检测方案[5]。纸片法则克服了多管发酵法的不足，将操作流程得以简化，检测成本得以降低，同时节省了大量时间。纸片法检测原理是为大肠菌群生长发育提供必须的指示剂、营养物质，以及提供抑制革兰氏阳性细菌生长的抑制剂，将其集中在纸片上，无色氯化三苯基四氨受氢在大肠菌群琥珀酸脱氢酶作用下变为无色化合物，在放置于一定温度的培养基中进行培养，如若存在大肠菌群，则分解的乳糖产酸会导致PH值显著下降，指示剂呈现为黄色，操作方便，能够快速得出检测结果。
本次实验结果显示：纸片法阳性检出率为14.0%，多管发酵法阳性检出率为18.0%，统计学方法处理两种检测方法的阳性率，差异无统计学意义，P>0.05。两种检测方法检测结果基本一致，由此说明两种检测方法均能用于检测水质总大肠菌群。
总之，在条件不具备状况下，可采用纸片法代替多管发酵法，其适用于个人及基层单位、小型供水工程自检，同时也适用于现场采集卫生监督检疫工作中，可快速检测，工作量也可大大减少，实用价值较高。
参考文献
[1]王琳. 生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较[J]. 临床合理用药杂志，2015（8）：166.
[2]侯西平. 纸片法和多管发酵法在水质总大肠菌群检验中的应用价值比较[J]. 医学信息，2015（1）：173.
[3]黄晓容. 水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较[J]. 生物技术世界，2016（4）：33，35.
[4]魏海明，张中伟. 纸片法快速检测生活饮用水总大肠菌群的探讨[J]. 铁路节能环保与安全卫生，2010，37（4）：209-210.
[5]朱培瑜，魏轲. 固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的比较[J]. 四川环境，2014，33（2）：30-33.
论文作者:张石华
论文发表刊物:《航空军医》2017年24期
论文发表时间:2018/2/4
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