（许昌市食品药品检验所 河南 许昌 461000）
【摘要】 目的：建立熄风瘫复丸中主要成分芍药苷的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18 5?m，4.6×250mm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；检测波长：230nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃。结果： 芍药苷进样量在0.12～1.2?g范围内与峰面积呈良好线性关系，r =0.9999；平均加样回收率为（99.49%），RSD为（1.11%）(n=9)。结论：本法操作简便，灵敏，准确，可用于熄风瘫复丸中芍药苷的质量控制。
【关键词】 熄风瘫复丸；芍药苷；高效液相色谱；含量测定
【中图分类号】R281 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）29-0350-02
Determination of Paeoniflorin in Xifeng Tanfu Pills by HPLC
Wang you-xin Yan guang-hua.Xuchang Institute for Food and Drug Control, Henan Xuchang 461000,China
【Abstract】Objective: To establish a reversed –phase HPLC assay for determining the Paeoniflorin in Xifeng Tanfu pills.Method:The chromatographic system consisted of Agilent ZORBAX SB-C18 5?m,150A,4.6 ×250mm column；mobile phase of acetonitrile -0.1mol/L phosphoric acid (14:86) with a detection wavelength at 230nm. The flow rate was 1.0 ml/min and the column temperature was 30℃ .Results: The linear range of Paeoniflorin was 0.12～1.2μg, r=0.9999.The average recovery was 99.49% and the RSD was 1.11%(n=9).Conclusion:This method is simple , reliable ,accurate, which offers advantages of higher sensitivity and higher precision and suitable for control the quality of Paeoniflorin in Xifeng Tanfu pills.
【Key words】Xifeng Tanfu pills, Paeoniflorin,HPLC,determination of content
熄风瘫复丸为禹州中医院中药制剂，处方组成为白芍、木瓜、枸杞子、续断、牛膝、丹参、土鳖虫、大黄、石菖蒲、陈皮等19味中药，粉碎成细粉,过筛，混匀，用水泛丸，干燥，再用60g炼蜜及药用炭包衣，打光，制成1000g丸剂。其中白芍为君药，具有滋补肝肾，活血化瘀，熄风通络之作用。用于中风后遗症，见半身不遂，患侧肢体强硬，屈伸不利。为了控制该制剂质量，保证临床用药安全有效，故选择该制剂中的君药白芍的主要有效成分芍药苷作为指标成分，进行分析研究。结果表明，芍药苷性质稳定，分离效果好，专属性强，干扰小，并具有较好的重现性，可用于熄风瘫复丸中芍药苷的质量控制。
1.仪器与试药
Agilent1260液相色谱仪，G1316A检测器,Openlab色谱工作站；MSA225S-000-DU电子天平。芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院 批号：110736-201539）；熄风瘫复丸（160110、160118、160130）与缺少白芍的阴性样品均为禹州市中医院制剂室制备；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 5?m，4.6×250mm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；柱温：30℃；检测波长：230nm；进样量：10?L。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品约60mg，置100mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液（每1mL中含芍药苷600μg）；精密量取5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1mL中含芍药苷60μg）。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，研细，精密称取细粉约1.2g，置50mL中，加50%甲醇溶液约30mL，超声处理（功率400W，频率120kHz）30分钟，放冷至室温，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为芍药苷测定的供试品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备
取缺少白芍的阴性样品适量，研细，精密称取细粉约1.2g，置50mL中，加50%甲醇溶液约30mL，超声处理（功率400W，频率120kHz）30分钟，放冷至室温，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为芍药苷测定的阴性对照溶液。
2.5 阴性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，进样分析，记录色谱图。从色谱图可见，熄风瘫复丸中其他成分对芍药苷的测定没有干扰（见图1）。
图1芍药苷对照品（A）、熄风瘫复丸样品（B）、熄风瘫复丸阴性对照（C）的HPLC色谱图
2.6 线性关系考察
精密吸取对照品溶液2、5、8、10、13、17、20?L，注入液相色谱仪，进样分析。以芍药苷峰面积积分值为纵坐标Y，进样量位横坐标X(?g)绘制标准曲线，得到回归方程Y=92.225X + 4.5651，r=0.9999，结果表明，芍药苷进样量在0.12～1.2?g之间呈良好的线性关系。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，于0、2、4、6、8、10h进样分析，测定，计算芍药苷峰面积积分值RSD为0.93%（n＝6）。结果表明，供试品溶液在10h内基本稳定。
2.8 精密度试验
取芍药苷对照品溶液10?L，重复进样6次，记录色谱图，计算芍药苷面积值RSD为0.62%。
2.9 重复性试验
精密称取供试品细粉（160110）5份，制备供试品溶液，测得平均含量2.2296mg?g-1，计算供试品中芍药苷含量的RSD为1.04 %（n＝5）。结果表明芍药苷该方法处理重复性良好。
2.10 回收率试验
精密称取已知含量的熄风瘫复丸（160110）约0.6g，分别精密加入芍药苷对照品溶液储备溶液适量，按2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1。
表1 芍药苷加样回收试验测定结果（n=9）
3.讨论
3.1 白芍为熄风瘫复丸的主药，具有具有平抑肝阳，养血收阴之功效，芍药中的芍药苷含量高，性质稳定，可以作为指标成分用以控制熄风瘫复丸的质量。
3.2 采用超声提取处理样品，比其他方法方法简单，样品损失少。
3.3 本法采用高效液相色谱法测定熄风瘫复丸中芍药苷的含量，方法的精密度、重现性、回收率均符合规定，操作简便，灵敏，准确，可用于熄风瘫复丸中白芍的质量控制。
【参考文献】
[1]中国药典[S]. 2015年版一部 . 105.
[2]马鑫.养血愈风颗粒中芍药苷含量的高效液相色谱测定方法[J].中国医药指南，2013，26（11）：340-342.
论文作者:王友新,阎广华
论文发表刊物:《医药前沿》2016年10月第29期
论文发表时间:2016/10/31
标签：芍药论文; 熄风论文; 溶液论文; 色谱论文; 精密论文; 白芍论文; 阴性论文; 《医药前沿》2016年10月第29期论文;