陈悦
（南充市中心医院风湿免疫科 四川 南充 637000）
【摘要】 目的：研究对类风湿性关节炎(RA)的患者采用甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗，对其滑膜成纤维细胞(FLS)Treg/Th17免疫平衡的影响。方法：选取本院于2014.9-2015.9期间收治的60例类风湿性关节炎的患者，按照随机数字表法将其分为A组30例与B组30例，A组采用甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗，B组单独使用复方风湿宁治疗，临床检测FLS增殖情况，使用MTT法检测；用ELISA法检测IL-10、IL-17、IL-22水平。观察两组OD值、FLS增殖抑制率及IL-10、IL-17、IL-22水平。结果：A组OD值低于B组，P<0.05。A组FLS增值抑制率高于B组，P<0.05。A组IL-10水平高于B组，P<0.05；B组IL-17、IL-22水平高于A组，P<0.05。结论：采用甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗RA，相较于单独使用复方风湿宁，可有效降低FLS中OD值，提高FLS增殖抑制率，提高IL-10水平。
【关键词】类风湿性关节炎；FLS；复方风湿宁
【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）12-0097-02
Joint compound anti-rheumatism methotrexate for rheumatoid arthritis synovial fibroblasts Treg/Th17 immune balance
Chen Yue
Nanchong central hospital rheumatism lmmunity branch Sichuan nanchong 637000,China
【Abstract】 Objective Research on rheumatoid arthritis (RA) patients treated with methotrexate joint compound anti-rheumatism, the synovial fibroblasts (FLS) Treg/Th17 immune balance. Methods Selection in our hospital from 2014.9 to 2015.9 admitted during the period of 60 patients with rheumatoid arthritis, according to random number table method to the 30 cases were divided into group A and group B, 30 cases in group A treated with methotrexate joint compound anti-rheumatism, group B treated with compound anti-rheumatism alone, clinical detection of FLS proliferation, determined by MTT method were used to detect; With ELISA method to detect IL - 10, IL - 17, IL - 22. Observe two groups of OD value, FLS proliferation inhibition rate and IL - 10, IL - 17, IL - 22. Results OD value lower than group B, group A (P < 0.05. FLS value-added inhibition rate higher than that of group B, group A (P < 0.05). IL - 10 group A level higher than that of group B, P < 0.05; Group B IL - 17 to 22, IL level higher than that of group A, P < 0.05). Conclusion Using methotrexate combined compound anti-rheumatism RA treatment, compared with single use compound anti-rheumatism, can effectively reduce the OD value in the FLS, improve the FLS proliferation inhibition rate, improve the level of IL - 10.
【key words】Rheumatoid arthritis; FLS;Compound anti-rheumatism
RA意指一种免疫系统疾病，主要表现为关节进行性病变，包括关节红肿疼痛、间隙过窄、软骨遭到破坏，疾病发展到后期可导致关节出现功能失调，畸形等[1]。发病人群多为女性且致残率较高，呈反复发作且无良好治疗方法。目前RA病因尚不明确，有学者研究显示其发病与免疫系统异常有关[2]，大部分患者于发病初期FLS呈非正常增长状态，且RA中存在Treg/Th17平衡，如果此平衡遭外源因素破坏，可能引发此病。所以临床治疗RA时，通过抑制Treg/Th17分化过程中的有效因子(IL-10、IL-17、IL-22)可避免破坏平衡。本文研究对RA的患者采用甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗，对其FLS中Treg/Th17免疫平衡的影响，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选取本院于2014.9～2015.9期间收治的60例类风湿性关节炎的患者，按照随机数字表法将其分为A组30例与B组30例，其中A组男10例，女20例，年龄41～66岁，平均年龄为(46.3±2.1)岁，病程1～6年，平均病程为(2.4±1.2)年；B组男8例，女22例，年龄40～65岁，平均年龄为(45.8±2.3)岁，病程1～5年，平均病程为(2.7±1.5)年。所有患者均符合RA临床诊断相关标准[3]。两组患者一般资料均无明显差异，P>0.05。
1.2 治疗方法
1.2.1 A组采用由Ebewe Pharma Ges.m.b.H.Nfg.KG生产的甲氨蝶呤注射剂(批准文号:注册证号H20080251；规格:5mg)，由广东罗浮山药业有限公司生产的复方风湿宁(批准文号:国药准字Z20027146；规格:5mg)，用生理盐水将其溶解，稀释至医嘱所标明浓度静滴。B组单独使用复方风湿宁。
1.2.2 FLS培养:保持无菌状态下将滑膜组织采用PBS溶液冲洗，去除组织上多余部分，保留最小部分滑膜，每分钟1000r，离心5分钟，舍弃上清，使用每毫升4mg的1型胶原蛋白酶消化2小时，保持温度在37度，在5%的二氧化碳下孵育。第二次按照上述方法离心10分钟，最后将其于链霉素与培养液中孵育。3天后更换培养液，选取第3与第4代细胞做实验。
1.3 观察指标
观察FLS增殖:采用MTT法检测，将滑膜组织给药后培养2天，加入每毫升5mg的MTT20μg，继续培养4小时，观察培养基转变为深蓝色更换液体为150μg的DMSO溶液，震荡10分钟，瓦解分裂细胞，于酶标仪上570纳米处吸光度(OD)值。计算增殖抑制率(%)=(1－A给药/A对照)×100%。IL-10、IL-17、IL-22水平：保持每分钟3000r的速度离心20分钟后，取上清液，是哦用ELISA法对上述指标进行检测，测定吸光度。计算浓度。
1.4 统计学处理
采用SPSS 18．0统计软件，计量资料用均数±标准差表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 观察两组患者FLS增殖情况
A组OD值低于B组，P<0.05。见表1。
3.讨论
RA主要表现为炎症反应及FLS异常增生，大部分RA患者在疾病发展后期，由于疼痛及关节畸形导致残疾，严重影响患者的生存质量。
有学者研究发现[4]，甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗RA可有效降低FLS中OD值，提高FLS增殖抑制率及IL-10水平。本文研究得出A组OD值低于B组，P<0.05。A组FLS增值抑制率高于B组，P<0.05。A组IL-10水平高于B组，P<0.05；B组IL-17、IL-22水平高于A组，P<0.05。与上述学者研究相符。
综上所述，采用甲氨蝶呤联合复方风湿宁治疗RA，相较于单独使用复方风湿宁，可有效降低FLS中OD值，提高FLS增殖抑制率，提高IL-10水平。
【参考文献】
[1]周大兵,王瑞琳,徐瑾等.类风湿性关节炎滑膜组织中IL-17和IL-10的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(5):527-530.
[2]陈磊,万峰春,王伟华等.类风湿性关节炎患者外周血环瓜氨酸肽抗体与CD4+CD25+调节性T细胞检测的意义[J].中华实验外科杂志,2012,29(6):1187-1189.
[3]王军,祖比亚,林德帅等.小剂量来氟米特联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的临床分析[J].重庆医学,2012,41(35):3704-3706.
[4]李志军,徐亮,李向培等.白芍总苷对甲氨蝶呤联合来氟米特治疗类风湿关节炎所致肝功能异常的影响[J].中华风湿病学杂志,2013,17(3):169-172.
论文作者:陈悦
论文发表刊物:《医药前沿》2016年4月第12期
论文发表时间:2016/5/18
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