（湖南省邵阳县城关镇医院 湖南 邵阳 422100）
摘要：近年来，随着生产力的发展以及科技水平的不断进步，在肺炎链球菌菌株的研究中发现，其对大环内酯类和青霉素等类型的抗生素的耐药性越来越强，这一严重的问题引起了学者的注意，如何解决肺炎链球菌菌株对抗生素的耐药性已经成为目前最为棘手的难题。本文通过探讨肺炎链球菌的检验技术和进展来寻求耐药性问题的解决方案。
关键词：检验技术； 肺炎链球菌； 耐药性； 进展
[中图分类号]R4[文献标识码]A文章编号：
肺炎球菌又称肺炎链球菌，由巴斯德等人1881年分离得出，从此进入到了人们的视野之中。肺炎链球菌呈链状排列，也可见成双排列，属于一种革兰氏阳性球菌。肺炎链球菌呼吸方式常见为兼性厌氧性，少数为专性厌氧呼吸。荚膜及其肺炎球菌溶血素是导致肺炎链球菌的主要致病因素[1]。肺炎链球菌的分型主要由抗原性荚膜提供依据。肺炎链球菌具有较强的致病力，在化脓性致病球菌中致病力只低于金黄色链球葡萄菌。肺炎链球菌是导致脑膜炎、大叶性肺炎、胸膜炎等心肺血液疾病的主要致病菌，临床上一般使用青霉素等抗生素进行针对性治疗。但是近年来肺炎链球菌菌株对抗生素产生耐药性的情况屡见不鲜，给肺炎链球菌感染疾病的治疗带来了很大的挑战，正逐渐引起人们的重视。本文现对肺炎链球菌进行有关检验技术及其有关进展的探讨。
1.药敏实验
1.1纸片扩散法：该纸片药敏试验法由美国临床实验室标准化委员会(NCCLS）推荐。选用羊血平板作为接种平板，接种菌液浊度为0.5.分离株的药敏试验需在CO2环境中进行。应将羊血平板置于5%的CO2环境中，温度调节为35°进行培养，培养时间为24h，培养结束后从正面进行量取。选用NCCLS规定大小的抑菌环[2]。纸片扩散法具有操作简便的优点，针对非β-内酰胺类药物的检测准确率高，但在针对青霉素类抗生素的检测准确率较低。
1.2微量稀释法：微量稀释法为NCCLS推荐的链球菌药敏试验的方法，微量稀释法使用离子校正过后的M-H肉汤与2%~5%的溶血马血相融合为培养基，将稀释后的抗生素与培养基相融合。使用羊血平板中的菌落来制成菌液，以0.5浊度为标准进行微量板的分装。温度调节为35°，普通条件下进行时长为24h的培养[3]。根据NCCLS制定的判定标准对结果进行人工判断。
2.肺炎链球菌的耐药性检验
目前大多数研究机构在对从人体血液等体液中分离出来的肺炎链球菌进行有关耐药性的测定时，只检测青霉素一种抗生素的耐药性。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆但据近年来多项权威研究结果表明，目前的肺炎链球菌产生耐药性的相关抗生素包括三代头孢等多种，所以仅仅检测一种青霉素的研究并不严谨，NCCLS针对这个情况也对研究过程进行了严格的规定，对于脑膜炎中分离得到的肺炎链球菌不仅要做有关对青霉素的耐药性测定，还应做头孢他啶及头孢曲松等多种抗生素的MIC，包括万古霉素的耐药性等[4]。而在针对中枢神经以外其他系统分离出来的肺炎链球菌时，先使用苯唑西林多肺炎链球菌进行β-内酰胺类药物的耐药性情况进行检测。当抑菌环大于20mm时，则可认为肺炎链球菌对β-内酰胺类药物以及青霉素等抗生素具有耐药性[5]。当抑菌环不足20mm时，需要再进行对头孢他啶、头孢曲松以及青霉素的耐药性检测。在对中枢神经系统以外分离出的肺炎链球菌株进行检测时需要增加对复方磺胺类药物及红霉素的敏感耐药性的检测。当掌握了红霉素的检测结果后就可以了解到阿奇霉素等大环内酯类抗生素的耐药性结果。自从1965年出现了第一例肺炎链球菌的耐青霉素情况以来，肺炎链球菌的相关耐药性报道就层出不穷，耐药性呈现逐年升高的趋势。在针对肺炎链球菌的疾病治疗时应检测清楚相关耐药菌情况，选择合适的抗生素进行针对性的有效治疗[6]。
3.分子流行病学研究方法
常使用的传统的细菌药敏试验以及荚膜血清学分型法，在临床上对于肺炎链球菌感染的预防与治疗上起到了很大的作用，但其局限性也日益暴露，难以为流行病学进行详尽的有关描述。分子流行病学研究方法此时就从众多方法中脱颖而出，用于填补肺炎链球菌耐药性分析的局限面。分子流行病学主要分为三个方面[7]：①：BOX-PCR：这是一段重复的DNA序列，其位于肺炎链球菌的染色体上，保守性高度体现，由A、B、C三个亚单位构成，使用BOXAI作为引物，以这一引物作为基础的PCR检测手段普遍得到使用。②核酸分子杂交：核酸分子杂交，又叫做核糖体分型，第一步我们需要借助限制性内切酶，完成对DNA的切割工作，然后DNA电泳后将其转移到尼龙膜内，将被标记的BOX片段与其进行杂交，来进行相关DNA片段同源性的比较。③限制性片段长度多态性分析（PFLP）:与②中提到的核酸分子杂交法具有相似之处，首先从细菌之中提取完整的DNA片段，借助限制性内切酶切割后对其进行电泳分离，对不同菌株之间的DNA片段进行比较，分析判断DNA片段之间的同源性。
肺炎链球菌对各种抗生素不断的产生耐药性，给肺炎链球菌感染的防治带来了巨大的难题，这与肺炎链球菌的治疗过程中滥用抗生素也息息相关。减少抗生素的滥用，加强对肺炎链球菌的耐药性的检验，并合理选用适宜的抗生素进行针对性治疗，有利于加强对肺炎链球菌菌感染的防止。
参考文献：
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[2]黄晓群,庞栋.肺炎链球菌的检验技术及其进展[J].医学文选,2006,25(4):867-870.
[3]王辉,陈民钧.肺炎链球菌对红霉素耐药机制的研究[J].中华检验医学杂志,2002,25(3):137-140.
[4]胡晓彦,桂炳东,王伶等.肺炎链球菌耐药性与分子流行病学研究[J].中华医院感染学杂志,2009,19(4):380-383.
[5] 张帅,刘宇思,王虹等.肺炎链球菌组氨酸激酶VicK的全长表达及其保守性分析[J].中国抗生素杂志,2014,39(2):131-136.
[6] 孙颜红,张少妮,楼永良等.肺炎链球菌phpP基因重组表达及其产物PP2C型磷酸酶活性的研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2014,(11):844-848.
[7] 潘芬,张泓.多重聚合酶链反应在肺炎链球菌血清学分型中的应用[J].检验医学,2014,(11):1089-1093.
论文作者:吕亮亮
论文发表刊物:《健康文摘》2015年11期
论文发表时间:2016/3/22
标签：链球菌论文; 肺炎论文; 耐药性论文; 抗生素论文; 青霉素论文; 菌株论文; 流行病学论文; 《健康文摘》2015年11期论文;