姜可
（黑龙江省齐齐哈尔市结核病防治所检验科 黑龙江齐齐哈尔 161000）
【摘要】目的：评价结核分枝杆菌药物敏感测定功能（MGIT960）法和L-J法（绝对浓度法）在耐多药结核杆菌(MDR-TB)药敏试验中的临床应用价值。方法：将耐多药的结核杆菌菌株，采用MGIT960法和L-J绝对浓度法对一线抗结核药物进行药物敏感性检测，比较两种检测方法的一致性。结果：经一线药敏试验确定为耐多药的菌株占总耐药率的 67.74%。MGIT960法和L-J绝对浓度法进行药物敏感性检测，符合率除ETH以外均在 80%以上，以绝对浓度法为金标准。结论：MGIT960法与L-J绝对浓度法对耐多药结核杆菌药敏检测结果除了ETH以外均具有很好的一致性，为耐多药患者一/二线药敏检测提供快速有效的诊断方法。
【关键词】耐多药结核杆菌;MGIT960法;绝对浓度法;药敏试验
【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）07-0088-02
结核病是严重危害人类健康的慢性传染病，近10余年来，由于艾滋病的流行、移民和流动人口的增加、耐多药结核分枝杆菌(MTB)的增多，以及不少国家和地区对结核病控制的忽视等因素，全球结核病形势急剧恶化。目前，全球已有20亿人感染MTB，活动性肺结核患者达2000万，每年新发患者达800万～1000万，新发患者中多耐药患者占3.2%，每年有300万人死于结核病。2009年WHO再次报告我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病年发患者数约为130万，占全球发患者数的14%，位居全球第2位，耐多药肺结核每年新发患者人数约12万。结核病是由MTB感染引起的慢性传染病，快速诊断和治疗是结核病控制的关键[1]，现在有关于报道检测MTB的新方法。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆本实验旨在利用BACTECMGIT960法对MDR-TB患者常用抗结核药物进行药敏检测，并与传统的绝对浓度法(L-J法)进行对比，探讨MGIT960法的临床应用价值，为临床制定MDR-TB治疗方案提供重要依据。
1.资料与方法
1.1 一般资料
400例痰标本来自2011年6月～2015年3月在齐齐哈尔市结防所接受治疗的初、复治结核病患者，其中男270例，女230例，年龄18～78岁，平均(41.2±20.3)岁，其中抗酸染色涂阳110例，涂阴290例。初、复治患者性别、年龄、取材差异均无统计学意义（P＞0.05）。
1.2 试剂
MGIT960液体培养基，MGIT生长添加剂（Growth supplement）和MGIT杂菌抑制剂(PANTA)均购自于美国BD公司，L-J固体培养基依据《结核病诊断实验室检验规程》由本院检验科微生物室制备。鉴别用PNB和TCH以及一、二线药粉全部购于美国Sigma公司，MGIT960法所用一线抗结核药物由BD公司提供。
1.3 方法
1.3.1 L-J法 参照《结核病诊断实验室检验规程》，一线药物药敏试验与二线药物药敏试验分别进行，从报阳第4～5ｄ的MGIT管（报阳后需置于37℃培养箱）吸取适量菌液于含玻璃珠的无菌小瓶内，漩涡振荡几秒钟，以0.5％吐温-80生理盐水配成1个麦氏比浊浓度，并用生理盐水稀释至10mg/ml和10mg/ml的菌悬液，取稀释好的菌悬液分别接种于对照和含药培养基，37℃培养，待菌落长出时观察结果，根据耐药百分比判别：耐药百分比＝（含药培养基的菌落数/对照培养基的菌落数）×100％，若耐药百分比＞1％为耐药（R），≤1％为敏感（S）。
1.3.2 MGIT960法 采用NALC-NAOH处理中和离心培养MTB。离心管壁标记患者的姓名等信息，将标本转移至离心管中，保证离心管内标本的体积至少为2ml；加入等体积的NALC-NAOH混合溶液；旋紧盖子，涡旋振荡消化不超过30s；室温静置15min～20min；加入0.067mol/L的pH值为6.8的磷酸盐缓冲液至40ml；3000×g，4℃，离心15min；在BBLMGIT生长培养管（7ml）中加入0.8ml的OADC和PANTA的混合试剂。离心结束后，将离心管取出，小心弃掉离心管内上清液至含消毒剂的废弃缸中，再加入0.5ml磷酸盐缓冲液至离心管中，混匀。吸取0.5ml前处理后的悬浮液，接种于液体培养基，于BACTEC MGIT960结核培养药敏检测系统进行检测。
2.结果
110例阳性标本中分离出耐药菌株62例，经一线药敏试验确定为耐多药的菌株42例，占总耐药率的67.74%。MGIT960法和L-J法进行药物敏感性检测，符合率除ETH以外均在80%以上，以L-J法为金标准[2]，MGIT960法的敏感度和特异度分别是SM 100%和93%，EMB 86%和81%，OFX 93%和88%，KM 92%和94%，ETH 100%和56%，CPM 88%和87% 。
3.讨论
肺结核病是由TB感染而引起的一种呼吸道传染病，一方面严重危害患者健康，另一方面具有强制传染性。因此，临床上早确诊、早治疗对于控制病情和其传播是非常重要的。MGIT960法与传统的L-J比例法药敏试验的符合率较好。异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星MGIT960法的准确性和Kappa值均大于0.75，说明以上7种药物MGIT960法与传统的L-J比例法药敏试验具有较好的一致性。乙硫异烟胺Kappa值0.75＞Kappa值≥0.4，说明两种方法的一致性一般。MGIT960法药敏试验的检测时间明显短于L-J比例法药敏时间[3]。MGIT960法完成一线药物药敏试验的平均时间为8d，完成二线药物药敏试验的平均时间为10d，L-J法药敏试验平均时间为30d。MGIT960法时间上提前近20多天，避免延误病情，提高治疗结核病的效率，从而有效地控制结核病及耐药结核病的传播。
【参考文献】
[1]金法祥，王华钧，许文芳等.4种新方法快速检测结核分枝杆菌的临床研究[J].中国卫生检验杂志，2015，25(21)：3638-3640.
[2]孙炳奇，张娟，孙秀华等.MGIT960 法和绝对浓度法对耐多药结核杆菌药敏检测比对分析[J].广东医学，2014，35(12)：1877-1879.
[3]陈忠南，赵丽丽，易松林等.BACTEEC MIGT960在结核分枝杆菌药物敏感性试验中的临床研究[J].中国人兽共患病学报2013，29(2)：166-169.
论文作者:姜可
论文发表刊物:《心理医生》2016年7期
论文发表时间:2016/8/8
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