黑龙江省塔河县十八站医院
【摘 要】抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，当加入抗该种球蛋白的抗体时，由于球蛋白与抗球蛋白抗体的特异性结合而出现凝集反应，显示出不完全抗体的存在。抗球蛋白试验的建立在血型血清上有着非常重要的意义。
【关键词】抗球蛋白；结果
1原理
红细胞表面包被了IgG抗体分子或补体分子C3、C4的片段，但不能产生凝集现象。IgG抗体和补体都是人球蛋白，用这些人球蛋白免疫动物，或用杂交瘤（hybridoma）技术可以得到抗球蛋白，这类抗体的特异性是针对IgG分子的Fc段或补体C3、C4的片段，可以和包被在红细胞上的抗体分子和补体分子作用，使红细胞发生凝集，抗球蛋白分子起着搭桥的作用。红细胞包被的抗体还可以是IgA或IgM，要用对应的抗IgA和抗IgM才能检出。
2抗球蛋白试剂
①多特异性抗球蛋白试剂 曾经称之为广谱抗球蛋白试剂，试剂中应含有抗IgG和抗C3d。如果用免疫动物制备的抗球蛋白，除抗IgG和抗C3d外，还可能含有抗C3b、抗C4b、抗IgM、抗IgA，但通常活性较低。用杂交瘤制备的单克隆抗体）则比较单一。多特异性抗球蛋白试剂主要用于配血试验和直接抗球蛋白试验，尤其是用于自身免疫性溶血性贫血的直接抗球蛋白试验。②单特异性抗球蛋白试剂 有抗IgG、抗IgM、抗IgA和抗C3、C4的片断，但实际应用的主要是抗IgG和抗C3d。
3方法
3.1直接抗球蛋白试验
直接抗球蛋白试验是用来检测体内被抗体或（和）补体致敏的红细胞。标本必须是抗凝血样，避免血液离体后被补体致敏，造成假阳性。操作时在小试管内加5%红细胞标本1滴，用足量生理盐水洗涤3～4次，每次倾到盐水要沥干，然后按试剂说明书加1～2滴最适浓度的多特异性抗球蛋白试剂，混匀后以1000转/分离心1分钟，立即轻轻摇起读取结果。如为阳性，用单特异性抗球蛋白再分型；如不凝集，置室温5分钟，再离心观察结果，如为阳性，是抗补体的反应结果。如两种情况都是阴性，要在反应试管中加1滴试剂对照细胞，即已被IgG和C3包被的红细胞，混匀后立即离心观察结果。如对照细胞阳性，上述阴性结果可靠。如对照细胞阴性，则阴性结果不可靠，可能是洗涤不成功，或抗球蛋白试剂失效。
直接抗球蛋白试验用于自身免疫性溶血性贫血和新生儿溶血病的诊断，以及溶血性输血反应的检查。
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3.2间接抗球蛋白试验
间接抗球蛋白试验是检测红细胞在体外致敏的方法。操作时在试管中加血清2滴，再加1滴相关的红细胞5%悬液，37℃孵育45～60分钟，用足量生理盐水洗涤3～4次，每次倾倒盐水要沥干，然后根据试剂说明书加抗IgG1～2滴，立即离心读取结果。如为阴性要加试剂对照细胞检查，对照阳性，结果可靠。同时还要做阳性对照、阴性对照（配血时做自身对照）。间接抗球蛋白试验用于配血，血型鉴定、抗体筛选和鉴定。
4试剂对照细胞的制备
在直接和间接抗球蛋白试验中，阴性结果都要用试剂对照细胞检查，要用IgG致敏的红细胞和补体致敏的红细胞。
4.1IgG致敏试剂对照细胞的制备：
①在试管中加入三人份混合的O型Rh阳性红细胞，加量看需要的用量而定。②加抗D血清，加量根据血液量和抗体效价而定，抗D效价如在128以上，每毫升血液加4～6滴。③37℃ 孵育15分钟。④洗涤4次，配成5%的悬液备用。如盐水悬液限当天使用，如用含腺嘌呤的保存液可在4℃保存1周。
4.2补体致敏试剂对照细胞的制备
①置20ml10%的蔗糖液于1大试管中。②加4～6滴新鲜血液，或加2滴洗涤过的压积红细胞和4滴AB型新鲜血清。③37℃孵育15分钟.④用生理盐水洗涤4次配成3%的悬液备用，4℃可保存48小时。
5结果分析
各种对照试验结果都正确，抗球蛋白试验的结果才能认定。有假阳性也有假阴性。
5.1假阳性结果的原因
①用免疫兔或羊制备的抗球蛋白中含有的种间抗体未吸收干净，也可以引起假阳性。用酶处理的细胞试验时，因敏感性增加，极微量的种间抗体也能引起假阳性。②红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。③间接抗球蛋白试验中所用红细胞本身已是直接抗球蛋白试验阳性，造成间接抗球蛋试验的假阳性。④所用红细胞被污染，或来自败血症的患者，已成为多凝集细胞，抗球蛋白试剂也含有抗T、抗Tn等抗体，造成假阳性。⑤不抗凝标本在冷环境里经一段时间的保存后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补体成分（主要是C4的片断）结合在红细胞个，用多特异性抗球蛋白试剂发生假阳性反应。⑥离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散，误为阳性反应。⑦所用盐水保存在质量较差的玻璃容器内，容器上脱落的硅胶可引起非特异性的红细胞凝集。保存在金属容器中的盐水，如有较多的金属离子，可导致蛋白非特异地吸附到红细胞上，造成假阳性。
5.2假阴性结果的原因
①致敏后的细胞洗涤不充分，残留的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。洗涤是抗球蛋白试验的关键步骤，所用试管要用10m×130m的规格，所加盐水量不得少于试管容量的3/4，加盐水前要把细胞充分摇散，加盐水时要有冲力，能充分混匀。或用玻璃纸隔开，用手指压住管口，颠倒混匀。每次倾倒上清液时，管口要吸干，至少要洗涤3次。
②操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗已经解离。洗涤完成后未及时加抗球蛋白试剂，或加抗球蛋白试剂后未立即离心看结果，都会使抗IgG的反应减弱，或变为阴性。而对于抗补体的反应来说，又必须在室温置5分钟后离心看结果为好。③红细胞、血清和抗球蛋白试剂保存不当，都可能发生活性减弱或丧失，引起假阴性。④离心过度，红细胞压得过紧，摇散时用力过大，把较弱的凝块摇散，均会造成假阴性。⑤红细胞过多，反应减弱，红细胞过少，看结果不准确，都影响结果。⑥所用血清的抗体浓度过大，洗涤后的红细胞可能有结合的抗体游离下来，中和抗球蛋白造成假阴性。⑦试剂中抗球蛋白浓度过大，有前带现象，造成假阴性。⑧孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假阴性。
参考文献：
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论文作者:杨凤丽
论文发表刊物:《航空军医》2016年第9期
论文发表时间:2016/6/23
标签：球蛋白论文; 红细胞论文; 试剂论文; 阳性论文; 抗体论文; 阴性论文; 补体论文; 《航空军医》2016年第9期论文;