（福建省宁德市中医院 352100）
摘要：目的 采用高效液相色谱法测定脑心通胶囊中丹参酮含量的方法，评价脑心通胶囊的质量。方法 步长脑心通胶囊（3批次），全自动高效液相色谱检测，配置隐丹参、丹参酮I、丹参酮Ⅱ对照品以及供试品溶液，绘制线性回归曲线，进行方法学评价。结果 丹参酮（A=6285.4c＋1.301）、丹参酮Ⅰ（A=4034c-3.162）、丹参酮ⅡA（A=5018c±6.145）的高效液相色谱法检测线性方程r均＞0.995，呈现高度相关性，线性良好。丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的高效液相色谱法重现性试验、精密度试验、回收试验相对保留时间RSD与峰面积RSD均＜3%，符合要求。供试品种，三个批次的药品中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱa含量在0.412～0.445mg/粒、0.305～0.325mg/粒、0.351～0.561mg/粒，变异指数符合要求，批次内的质量标准达到要求，但不同批次内的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱa含量存在显著差异（P＜0.05）。结论 高效液相色谱法测定脑心通胶囊中丹参酮的效能较好。脑心通胶囊中的丹参酮含量批间质控水平有待提高。
关键词：脑心通；丹参酮；高效液相色谱法
血栓性疾病是人类死亡的常见病因，脑血栓、肺血栓、急性心肌梗死等。脑心通胶囊是治疗血栓性、缺血性疾病的常用药物，以补阳还五汤为主方，具有益气养血、活血化瘀、扶正祛邪功效，meta分析显示相较于其他疗法，在治疗脑血栓、缺血性脑血管疾病、冠心病心绞痛方面有明显的优势可增进疗效[1-3]。丹参酮是脑心通胶囊中主要有效成分，现已有丹参酮为主要原料的注射液应用于血栓性疾病的治疗，疗效往往也较好。脑心通胶囊的疗效很大程度依赖于丹参酮的含量，本次研究尝试探讨采用高效液相色谱法测定脑心通胶囊中丹参酮含量的方法，评价脑心通胶囊的质量，现总结研究结果报道如下。
1材料与方法
1.1 实验药品
步长脑心通胶囊（3批次）。
1.2 仪器与试剂
全自动高效液相色谱仪（二极管阵列检测器），Agilent工作站。隐丹参、丹参酮I、丹参酮Ⅱ对照品，中国药品生物制品检定所提供。甲醇色谱纯，冰醋酸分析纯，熏蒸水，电子天平，各种型号、容积的试管。
1.3 方法
1.3.1 溶液制备
（1）对照品溶液：精密称量隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA适量，置25ml棕色量瓶，75%甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，分别配置成为219、35.1、292、41.4、40.2、37.5μg/ml浓度的对照品储备液。4℃下保存，试验时，可取对照片储备也，分别置于2.0、2.5、3.0ml，置入10ml量瓶，采用75%乙醇稀释至刻度，摇匀，配置成为6.63、43.2、87.5μg/ml的混合对照溶液。
（2）供试品溶液：取脑心通胶囊6粒，倒出其中内容物，混匀，称量1.005g，置入100ml具塞锥形瓶中，加入75%甲醇25ml，浸没药品，静置12h，称重，超声处理30min，置冷，称重，采用75%甲醇补充损失重量，摇匀，减压，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液。
1.3.2 检测
（3）色谱条件：柱温30℃，流速1.0ml/min，流动相：甲醇（A）-1%冰醋酸（B），梯度洗脱：A：0～13min，20%；13～15min，线性改变至52%；15～28min，52%；28～33min，线性改变至82%；33～52min，82%，后运行10min，进样量20μl，在270nm波长处检测。
（4）检验：吸取混合对照品融合过0.45μm滤膜，分别进样5、15、25、35、45、55、65、75μl，记录色谱峰面积（A），以其作为因变量纵轴，进样量（c，ng）作为因变量，横轴，进行线性回归分析，分析隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA回归方程。
1.3.3 方法学考察
检验限：逐步稀释后，注入高效液相色谱仪，直至色谱峰高为噪声3倍，则为最低检出限。精密度试验：20μ对照品溶液，上机，进样6次，记录峰面积RSD。稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、16、24h进样20μl，记录峰面积计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA峰面积的RSD。重现性：制备6份供试品溶液，进样20μl，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA平均含量与RSD。回收性考察：取已知含量的脑心通胶囊药粉0，5g每份，合计6份，按照隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA指标成分80%、100%、120%的量加入对照品溶液，挥干容积，同时制备新的供试品溶液，进样20μ，外标法计算回收率。
1.3.4 供试品测定
步长脑心通胶囊（3批次）制备供试品溶液，每个样品检测5次，计算样品中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量。
1.4 统计学处理
采用SPSS20.0软件进行统计学计算，含量服从正态分布采用（Mean±SD）符号（±s）表示，比较采用t检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1 丹参酮的线性回归方程以及方法学评价
丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的高效液相色谱法检测线性方程见下表1，r均＞0.995，呈现高度相关性，线性良好。HPLC质谱图如下。
3 讨论
本次研究尝试构建了针对脑心通胶囊中丹参酮成分分析方法，结果显示丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的高效液相色谱法检测线性方程r均＞0.995，呈现高度相关性，线性良好。HPLC是当前公认的检测物质含量精密度最好的一类测量技术，被大量用于中药中活性成分的分析，本次研究中方法学评价显示重现性、精密度、回收试验的参数均符合要求，可作为三种成分的定量分析技术。
对脑心通胶囊供试品研究显示，三者的含量均较小，均低于0.06mg/粒，主要来源于脑心通胶囊中的丹参。脑心通胶囊全方含有16种中药，丹参含量较少，有效成分丹参酮则含量更少。从质控角度来看，批次内的质量标准达到要求，RSD均在1%以内，但需注意的是不同批次内的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱa含量存在显著差异（P＜0.05），提示批间质控有待提高。当然这也可能与丹参酮成分本身占比较少质控难度较大有关。丹参酮并非脑心通胶囊占比最高的有效成分，是否可作为质量评价指标仍然存在争议，考虑到其来源较集中，可选择其中含量最高的成分即丹参酮Ⅱα作为药品的质控目标成分。当然，对于一种中药制剂的质量评价，还应依据指纹图谱，不仅可进行定量分析，还可进行定性分析，这一方面HPLC存在一定的局限性，高效液相色谱-质谱联用技术应用价值相对更高[4-5]。HPLC适合较少成分的定量分析，分析某个工艺环节对某一成分的影响。目前针对中药复方制剂中的有效成分检测、质量控制一致是难题，中药复方制剂重点成分驳杂，成分众多，制药技术中采用传统的制剂方法较多，这些都会影响药物的质量稳定性[6]。药物质量稳定性的变化，必然会影响其药性，今后有必要加强脑心通胶囊质量综合评价体系建设。
小结：高效液相色谱法测定脑心通胶囊中丹参酮的效能较好，脑心通胶囊中丹参酮的含量较少，丹参酮含量批间质控水平有待提高，可尝试将丹参酮Ⅱa作为质控目标。
参考文献
[1]王英，张昱，王小艺，等.基于Meta分析的脑心通胶囊药物经济学分析[J].中国循证心血管医学杂志，2016，8（11）：1379-1385.
[2]杨柳，郭毅.脑心通胶囊治疗短暂性缺血性脑发作的Meta分析[J].中药药理与临床，2015，31（4）：202-207.
[3]侯江红，张龙龙，李军农，等.脑心通胶囊辅助治疗不稳定型心绞痛的临床疗效和安全性的Meta分析[J].现代生物医学进展，2014，14（8）：1545-1549.
[4]熊亚群，刘雁鸣.高效液相色谱技术在药用辅料检测中的应用新进展[J].中南药学，2015，13（01）：61-64.
[5]韦建乔，韦波.高效液相色谱-质谱联用技术在中药研究中的应用进展[J].中国医药科学，2016，6（05）：44-46.
[6]李红玉.高效液相色谱法测定舒神灵胶囊中丹参酮ⅡA含量[J].中国药业，2013，22（19）：45-46.
作者简介：张铭玉（1966.01一），女，毕业于福建中医药大学，副主任药师，从事临床中药学工作
论文作者:张铭玉
论文发表刊物:《航空军医》2017年第19期
论文发表时间:2017/11/22
标签：丹参酮论文; 胶囊论文; 高效论文; 色谱论文; 含量论文; 液相论文; 溶液论文; 《航空军医》2017年第19期论文;