湖南省妇幼保健院 湖南长沙 410008
摘要：目的 探讨hWAPL蛋白在宫颈癌中的表达及与患者临床病理学特征的关系。方法 选取在我院病理科收集的90例宫颈癌组织标本（宫颈癌组）、90例宫颈上皮瘤变组织（CIN组），收集时间2015年3月～2017年1月，检测两组标本中的hWAPL蛋白表达水平，探讨hWAPL蛋白与宫颈癌患者的年龄、国际妇产联盟（FIGO）分期、组织学分级等指标的关系。结果 宫颈癌组的hWAPL蛋白阳性表达率74.44%（67/90）显著的高于CIN组的12.22%（11/90），差异具有统计学意义（P<0.05）；FIGO分期为Ⅲ期、低分化、间质浸润≥1/2、发生淋巴结转移、发生脉管浸润的宫颈癌组的hWAPL蛋白阳性表达率显著的高于Ⅰ和Ⅱ期、高和中分化、间质浸润<1/2、未发生淋巴结转移、未发生脉管浸润的公斤癌患者，差异均具有统计学意义（P<0.05）；hWAPL蛋白阳性表达在≥50岁、<50岁的宫颈癌患者表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 hWAPL蛋白在宫颈癌中表达显著上调，并且与宫颈癌的发生发展密切相关。
关键词：hWAPL蛋白；宫颈癌；宫颈上皮瘤变
Expression of hWAPL protein in cervical cancer and its clinicopathological significance
【Abstract】Objective To investigate the expression of hWAPL in cervical cancer and its relationship with clinicopathological features. Methods Ninety specimens of cervical cancer（cervical cancer）and 90 specimens of cervical epithelial neoplasia（CIN）collected in our hospital were collected from March 2015 to January 2017. The specimens from two groups hWAPL protein expression levels of hWAPL protein and cervical cancer patients age，the International Union of Women（FIGO）staging，histological grade and other indicators.Results The positive expression of hWAPL protein in cervical cancer group was 74.44%（67/90）higher than that of CIN group was 12.22%（11/90），the difference was statistically significant（P<0.05）；FIGO stage III and low differentiation，interstitial infiltration was 1/2，lymph node metastasis，vascular invasion of the cervical cancer group the positive expression of hWAPL protein the rate is significantly higher than that in stage I and II，and in high differentiation，interstitial infiltration of <1/2，lymph node metastasis，no lymphvascular kg cancer patients，the differences were statistically significant（P<0.05）；the positive expression of hWAPL protein in more than 50 years old，<50 year old patients with cervical cancer the expression difference was not statistically significant（P>0.05）. Conclusion The expression of hWAPL protein in cervical cancer is significantly up-regulated，and is closely related to the occurrence and development of cervical cancer.
【Key words】HWAPL protein；cervical cancer；cervical intraepithelial neoplasia
流行病学研究显示，宫颈癌的发病率可达233-456/10万人左右[1]。临床上宫颈癌的五年生存率较低，治疗后的中位生存时间等预后指标较差[2]。在探讨宫颈癌的发病机制的过程中发现，细胞增殖调控因子的变化，能够通过影响到早期宫颈柱状上皮细胞的裂变、细胞异型性等，进而促进癌细胞的早期的发生和浸润。hWAPL（human wing-apart like）蛋白，最早在果蝇体内发现，其能够影响到果蝇的翅膀缺失。在基础生物学方面，hWAPL蛋白能够通过阴性到细胞周期调控、癌细胞的早期有丝分裂过程，促进持续性DNA的增殖风险，增加上皮细胞来源恶性肿瘤的发生[3，4]。已经证实的是，hWAPL蛋白能够在影响到卵巢癌或者甲状腺癌等恶性肿瘤的过程中，促进临床分期的进展，增加远期的病死率，但在宫颈癌中的研究不足。为了进一步评估hWAPL蛋白与在宫颈癌发生的关系，本次研究选取在我院病理科收集的90例宫颈癌组织标本，探讨了hWAPL蛋白在宫颈癌患者病灶组织中的异常表达情况，并探讨了其与患者临床病理特征的关系，报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料
选取在我院病理科收集的90例宫颈癌组织标本（宫颈癌组）、90例宫颈上皮瘤变组织（CIN组），收集时间2015年3月～2017年1月。
宫颈癌组，年龄39～64岁，平均53.4±8.5岁，FIGO分期：Ⅰ期16例、Ⅱ期35例、Ⅲ期39例；组织学分级：高分化20例、中分化36例、低分化34例；发生淋巴结转移48例、脉管浸润50例。CIN组，年龄39～65岁，平均55.2±7.9岁，CINⅠ级42例、CINⅡ级30例、CINⅢ级18例。三两组患者的年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2纳入排除标准
1.2.1纳入标准：（1）宫颈癌组织来源于本院手术切除后后病例；（2）年龄范围≤65岁；（3）手术前患者未接受放化疗；（4）CIN、宫颈癌均经过病理学检查证实；（5）两组标本获取的研究对象的临床资料完整。
1.2.2排除标准：（1）转移性宫颈癌、伴有其他部位恶性肿瘤；（2）既往具有放化疗史；（3）资料不完整难以进行统计分析。
1.3免疫组化染色方法
所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法（strep avidin—biotin complex，SABC法）染色，二氨基联苯胺（diamionben zidene，DAB）显色。hWAPL蛋白抗体、PV6000通用型二抗以及SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性及阴性对照，高倍显微镜下观察hWAPL蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。
1.4免疫组化结果判定
免疫组化结果判定：hWAPL蛋白的阳性着色表达于细胞浆，呈黄色、棕黄色、褐色表达，（1）根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；（2）根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例>75%为4分，两种积分相乘总分<3分为阴性、≧3分为阳性。总分<3分：“-”表达；为3～5分，“+”表达；为6～9分，“++”表达；>9分，“+++”表达。
1.5统计学方法
统计软件采用SPSS16.0，采用均数±标准差（±s）进行统计描述，计量资料组间t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；P值<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1两组标本中hWAPL蛋白阳性表达率比较
宫颈癌组的hWAPL蛋白阳性表达率74.44%（67/90）显著的高于CIN组的12.22%（11/90），差异具有统计学意义（P<0.05）；（表1，图1）。
图1 hWAPL蛋白的免疫组化染色结果，A为宫颈癌组织中hWAPL蛋白强阳性表达，B为CIN Ⅰ级宫颈组织中hWAPL蛋白阴性表达，（400倍）。
2.2 hWAPL蛋白阳性表达与宫颈癌患者临床病理学特征的关系
FIGO分期为Ⅲ期、低分化、间质浸润≥1/2、发生淋巴结转移、发生脉管浸润的宫颈癌组的hWAPL蛋白阳性表达率显著的高于Ⅰ和Ⅱ期、高和中分化、间质浸润<1/2、未发生淋巴结转移、未发生脉管浸润的公斤癌患者，差异均具有统计学意义（P<0.05）；hWAPL蛋白阳性表达在≥50岁、<50岁的宫颈癌患者表达差异无统计学意义（P>0.05）；（表2）。
3.讨论
宫颈癌的病情进展相对较为隐匿，虽然早期部分患者可表现为不规则的阴道流血，但临床上多数患者无特异性的症状，病情的早期诊断水平较低[5]。同时宫颈癌的手术治疗或者放化疗治疗后，患者的病死率或者生存时间等指标均无明显改善[6，7]。一项包含了334例样本量的多中心的宫颈癌临床诊疗分析研究显示，宫颈癌的早期诊断水平不足45%，治疗后的病情缓解率不足30%，无瘤生存时间不足24个月[8]。本次研究通过对于相关分子生物学水平的相关研究，不仅能够在揭示宫颈癌的发病机制方面提供参考，同时可以对于疾病的诊断提供潜在的临床研究对象。
hWAPL蛋白水平的改变对于肿瘤信号通路的激活，能够交错式激活患者体内的癌细胞转录调控因子，提高癌细胞DNA的扩增速度。hWAPL蛋白通过对于络氨酸的磷酸化效应，能够促进癌细胞膜表面糖蛋白配体的激活，促进癌细胞细胞周期调控依赖性蛋白激活的转录及翻译，增加G1/S期比例，降低G0期细胞的总数[9，10]。部分研究证实，hWAPL蛋白能够在促进肿瘤干细胞核错配基因的释放，增加癌相关基因对于临近正常组织细胞的浸润，增加癌细胞的复发风险，提高癌病灶组织对于临近正常组织的浸润深度[11，12]。同时hWAPL蛋白结构上包含了多个可结合AKT信号通路配体，通过激活体内的下游AKT或者NOTCH信号通路，增加癌细胞粘附血管内皮细胞或者淋巴结内皮细胞的可能，促进癌细胞通过淋巴结或者血行转移的风险。部分研究揭示了hWAPL蛋白与妇科恶性肿瘤的关系，认为高表达的hWAPL蛋白是促进患者细胞异常分化、细胞分裂异常的重要风险因素，但对于其与宫颈癌患者临床病理特征的关系研究不足。
本次研究发现，在宫颈癌病灶组织中可以发现hWAPL蛋白的显著高表达，提示hWAPL蛋白可能参与到了宫颈癌的发生发展过程中，相关指标的异常表达可能通过影响到下列几个方面的因素进而促进临床病理特征的进展：（1）hWAPL蛋白能够增加早期宫颈柱状上皮细胞分裂的异常，增加癌细胞的分化诱导凋亡障碍，癌细胞的凋亡减少，增殖速度明显增快；（2）hWAPL蛋白能够通过对于肿瘤干细胞特性的维持作用，增加癌细胞浸润及侵袭的能力。Shruthi P S等[13，14]研究者在探讨不同临床病情的宫颈癌患者的发病机制的过程中发现，hWAPL蛋白的平均表达阳性率可平均上升25%以上，同时在治疗敏感性较差、治疗后病情缓解率较低等的患者中，hWAPL蛋白的高表达更为明显。免疫组化分析可见，hWAPL蛋白主要定位于癌细胞的细胞周边及细胞质内，提示hWAPL蛋白可能影响到癌细胞间的信号通路的传递，并干预到细胞内信号转导等，促进宫颈癌的发生。在探讨hWAPL蛋白与宫颈癌患者临床病理特征的关系过程中发现，在细胞分化程度较差、发生淋巴结转移或者临床分期较晚的患者中，hWAPL蛋白的表达阳性率较高，这可以从下列几个方面进行理解：（1）hWAPL蛋白对于淋巴结内皮粘附分子adherin 1的表达的上调作用，能够增加宫颈癌细胞通过宫旁、闭孔淋巴结等转移风险；（2）hWAPL蛋白对于临近宫旁组织的浸润，或者对于阴道壁的浸润作用，能够增加宫颈癌患者的临床分期。发生了脉管浸润的宫颈癌患者，其hWAPL蛋白的表达阳性率可进一步上升，这可能与hWAPL蛋白对于癌细胞的变形、弥散及渗透效应的促进作用有关。但本次研究并未发现hWAPL蛋白的表达与宫颈癌患者年龄的关系，提示年龄或者绝经等因素对于宫颈癌病灶组织中的hWAPL蛋白表达可能并无影响。
本次研究的创新性在于探讨了hWAPL蛋白与宫颈癌患者脉管浸润或者浸润深度的关系。综上所述，hWAPL蛋白在宫颈癌中表达显著上调，并且与宫颈癌患者的临床病理特征具有密切的关系。
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论文作者:蒋文琛,李攀,李珍,黄洁
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年第7期
论文发表时间:2018/5/21
标签：宫颈癌论文; 蛋白论文; 患者论文; 阳性论文; 癌细胞论文; 淋巴结论文; 细胞论文; 《中国误诊学杂志》2018年第7期论文;