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摘要：目的 对盐酸氨柔比星中的对映异构体进行测定。方法 采用手性色谱柱高效液相色谱法Phenomemex Lux Cellulose-1（250×4.6mm，5μm），以磷酸盐缓冲液（pH7.0）-乙腈为流动相，检测波长为254nm，流速为每分钟1.0ml下。结果 盐酸氨柔比星与与对映异构体能得到良好的分离，出峰时间合适，峰面积与浓度在一定范围内呈良好的线性关系。结论 该方法专属性强，作为盐酸氨柔比星对映异构体的检测方法准确、可靠。
关键词：盐酸氨柔比星 对映异构体 液相色谱
Abstract：Objective：To establish a HPLC method for determination of enantomer in Amrubicin Hydrochloride.Methods：The method was determined by HPLC with Phenomenex Lux Cellulose-1（250×4.6mm，5μm）column；The mobile phase was phosphate buffer（pH7.0）- acetonitrile，detection wavelength was 254nm；The flow rate was 1.0mL/min.Results：The enantiomer could be well separated from the main peak of Amrubicin Hydrochloride with a suitable retention time，and the calibration curves showed a good linear relationship within a certain range.Conclusion：The method is suitable for the determination of enantiomers in Amrubicin Hydrochloride and be accurate and reliable.
盐酸氨柔比星在国外已成为治疗晚期小细胞肺癌的一线用药，在肺癌的治疗上有良好的前景[1]，但是较高的使用成本使该药物在国内仍没有广泛使用。有研究表明盐酸氨柔比星联合顺铂治疗晚期小细胞肺癌取得了较好的疗效。该药品是由日本住友制药株式会社开发，通过全合成得到的第三代蒽环类抗生素，是强有力的DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，该药用于非小细胞肺癌和小细胞肺癌的治疗[2 3 4]。从盐酸氨柔比星的化学结构中可以看出，该化合物具有两个手性中心，手性化合物异构体的存在可能会影响药物的疗效，甚至产生毒副作用，对患者的生命健康带来隐患，所以异构体检测方法的建立是很有必要的。本样品中所存在的异构体是从起始原料中引入，再经过合成而产生，因为其中非对映异构体在起始原料中就得到了很好的控制，所以只需对对映异构体进行检测控制。参考ICH指导原则及《中国药典》四部通则要求，本实验建立了盐酸氨柔比星对映异构体检测方法。
1.仪器与试剂
仪器：Agilent1200高效液相色谱仪，Agilent Chemstation色谱工作站，电子分析天平梅特勒XS205；pH计FE20。色谱柱Phenomemex LuxCellulose-1（250×4.6mm，5μm）。试剂：乙腈为色谱级，来自MERCK公司；磷酸二氢铵，氨水，磷酸均为分析纯，来自国药集团化学试剂公司；盐酸氨柔比星及异构体对照品均由江苏豪森药业集团有限公司自制。
2 实验过程与结论
2.1色谱条件：照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512），采用手性色谱柱（Lux Cellulose-1 250×4.6mm，5μm），以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵2.3g，加水900ml使溶解，以氨水调节pH值至7.0，加水至1000ml）为流动相A，乙腈为流动相B；波长254nm，流速为每分钟1.0ml，柱温25℃。按下表梯度洗脱。
2.2 溶液稳定性测试：分别用稀释液①、稀释液②溶解样品并考察供试品在两种稀释液中的稳定性；试验结果见下表。
备注：
稀释液①：磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵 2.3g，加水 900ml 使溶解，用氨水调节 pH 值至 7.0，再加水至 1000ml）-乙腈（55︰45）；
稀释液②：磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 6.8g，加水 900ml 使溶解，用磷酸溶液调节方法 pH 值至 3.0，再加水至 1000ml）-乙腈（75︰25）为流动相。
由表可以看出，供试品在稀释液①条件下室温放置 2 小时主峰降解严重；供试品在稀释液②条件下室温放置 24 小时，主峰大小无变化，异构体均未检出。根据溶液稳定性考察结果，选定稀释液②作为稀释液。
2.3 溶液配制：稀释液，磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾6.8g，加水900ml使溶解，用磷酸溶液调节pH值至3.0，再加水至1000ml）-乙腈（75︰25）；取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加溶解液稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置10ml量瓶中，加溶解液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取盐酸氨柔比星异构体约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体母液；取盐酸氨柔比星约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密量取异构体母液0.5ml置该量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体系统适用性溶液。
2.4 系统适用性实验：量取5ul系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。可以看出，氨柔比星异构体及氨柔比星依次出峰，相互之间分离良好，分离度5.3，表明方法专属性良好。
2.5 检测灵敏度试验：在确定的色谱条件下，配制不同浓度的样品溶液，分别进样确定盐酸氨柔比星与异构体检测限（信噪比约为3）和定量限（信噪比约为10），实验结果见表。
结果表明，供试品溶液平行6份测试结果均为未检出，加样溶液检出异构体为0.21%~0.22%，SD值为0.01%，表明该方法重复性良好。
2.8回收率试验：称取盐酸氨柔比星供试品约1.0g，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并摇匀，制备回收率基质样品溶液，分别量取5ml基质样品溶液置50ml量瓶中，加入相当于异构体限度的15%、50%、100%、150%的溶液各三份，作为回收率测试溶液。定量测试的异构体12份样品回收率值为93.81%~100.07%，平均回收率为97.2%，RSD为1.9%，表明该方法对盐酸氨柔比星异构体的测试是准确可靠的。
3.讨论
本文开发了一种准确可靠的液相方法，能对盐酸氨柔比星中的对映异构体进行有效的检测和控制，方法验证结果表明，该方法专属性良好，检测限和定量限结果显示方法有较高灵敏度；另对线性、重复性和回收率结果进行测定，实验显示各项测试结果良好，能对异构体进行准确定量检测，该方法能够满足对盐酸氨柔比星对映异构体的含量控制。
参考文献
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[3] 王家美，尚彦君，周启玮。氨柔比星联合顺铂治疗晚期小细胞肺癌患者不良反应的护理[J]，护理实践与研究，2012，9（19）：83-84。
[4] 卢红阳，陈莉莉，蔡菊芳，等．氨柔比星治疗小细胞肺癌研究进展[J]．中国肺癌杂志，2010，13（5）：544-549。
[5] 国家药典委员会.中国药典四部通则[S]．中国医药科技出版社，2015：59，374。
论文作者:张翠通讯作者 掌效舟 孙井龙 李赛 顾娟
论文发表刊物:《航空军医》2018年16期
论文发表时间:2018/11/21
标签：稀释液论文; 盐酸论文; 溶液论文; 异构体论文; 色谱论文; 肺癌论文; 磷酸论文; 《航空军医》2018年16期论文;